10.3969/j.issn.1671-7236.2012.06.005
猪繁殖与呼吸综合征病毒主要结构蛋白基因半定量RT-PCR方法的建立及其在RNA干扰研究中的应用
为了建立以GAPDH基因为参照的半定量RT-PCR检测方法,根据PRRSV VR2332株病毒基因组和GAPDH序列设计4对特异性引物,分别扩增GP5、M、N和GAPDH基因序列,将shRNA表达质粒和GP5、M、N真核表达质粒共转染HEK293A细胞,应用该法检测了转染孔中GP5、M、N的相对表达量.同管和分管扩增法均建立了以GAPDH基因为参照的半定量RT-PCR检测方法.靶向GP5、M和N蛋白基因的shRNA表达质粒对其各自蛋白的抑制率为36%~69%,其中pSi-N3和pSi-G1抑制效果最为显著.结果表明,建立的半定量RT-PCR可以用于PRRSV主要结构蛋白基因表达水平的检测分析中.
PRRSV、结构蛋白、半定量RT-PCR、RNA干扰
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S854.4+3(动物医学(兽医学))
青岛农业大学高层次人才启动基金6630719;国家科技支撑计划子课题2009BADB4B04-1
2012-08-13(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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