禽流感病毒通用型及H5亚型套式荧光RT-PCR检测方法研究

摘要：

将套式PCR与荧光RT PCR技术相结合,叠加这两种技术在敏感性和特异性方面的优势,建立敏感性高于常规荧光RT-PCR的套式荧光RT-PCR检测方法.从GenBank下载禽流感病毒NP基因和HA基因序列,通过比对选取较为保守的片段,设计AIV通用型及H5亚型套式荧光RT-PCR引物和TaqMan探针；利用体外转录技术制备阳性对照,构建目的片段重组质粒；经反应体系和反应条件的优化,建立套式荧光RT-PCR检测方法.试验结果表明,该方法可特异性地检测禽流感病毒及H5亚型AIV,在30份鱼类养殖水样中检测到19份阳性样品,具有较高的敏感性和良好的特异性；具有高通量、快速的特点,可对大批量样品同时进行检测,试验耗时仅需5h,是自然环境样品中极微量禽流感病毒检测的好方法.

关键词：禽流感病毒、通用型、H5亚型、套式荧光RT-PCR、检测方法

所属期刊栏目：39

分类号：S852.65(动物医学（兽医学）)

资助基金：广东省农产品安全生产关键技术研究与示范重点专项2009A020101006;广东省农业攻关项目2007B020803004;质检总局科技项目2008IK025;珠海市科技项目PC20071055

在线出版日期：2012-05-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：165-171