中国斗鸡DJ-1基因克隆与原核、真核表达研究

摘要：

本研究以中国斗鸡λ噬菌体cDNA文库为模板,克隆了DJ-1基因,并构建了pGEx-4T-1-DJ-1原核表达载体和pEGFP-N3-DJ-1真核表达载体,前者用来研究DJ-1蛋白在大肠杆菌表达系统中的优化表达;后者用来转染成纤维细胞系,研究DJ-1蛋白的亚细胞定位和建立转DJ-1基因的细胞模型.试验成功克隆了DJ-1基因的CDS区,并将其定向插入到pGEX-4T-1原核表达载体和pEGFP-N3真核表达载体中.IPTG浓度梯度诱导原核表达结果显示,在0.8 mmol/L时DJ-1蛋白表达量最高;时间梯度结果显示,在8h时DJ-1蛋白表达量最高;真核表达载体转染脂尾羊成纤维细胞后48h阳性率最高,DJ-1蛋白在细胞核和胞质中均有表达,但胞质中居多.上述结果表明,本试验已经建立了稳定的DJ-1蛋白的真核、原核优化的表达系统,为进一步研究DJ-1基因的功能奠定了基础.

关键词：中国斗鸡、DJ-1、克隆、真核表达、原核表达

所属期刊栏目：37

分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家科技支撑项目:"畜禽特色优异基因资源挖掘与种质创新"2008BADB2B01;国家科技支撑项目:"畜禽基因资源发掘与种质评价利用研究"2006BAD13B08;转基因生物新品种培育科技重大专项2008ZX08009-003

在线出版日期：2010-06-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：70-74