抗蓖麻毒素单链抗体基因的构建及其在大肠杆菌中的表达
为构建和表达抗RT单链抗体(ScFv)蛋白,用RT-PCR方法从能分泌特异性抗RT单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞中分离纯化抗体VH和VL基因.用重叠延伸PCR方法将VH和VL拼接在一起,构建抗RT-ScFv基因.将ScFv基因连接到pMAL-p2X表达载体,转化TB1表达菌.阳性克隆用IPTG诱导18h,Western blotting鉴定重组蛋白.结果表明,试验成功扩增出了ScFv基因.长度约为750bp.通过DNA序列测定和分析,构建出VL-(Gly4 Ser)3-VH.其VH全长363 bp,可编码121个氨基酸,VL全长324 bp,可编码108个氨基酸.SDS-PAGE和Western blotting分析结果表明,抗RT-ScFv在TB1表达菌中获得高效表达,pMAL-p2X表达的ScFv加上同时融合表达的MBP标签分子质量约为75 ku.本试验成功构建了pMAL-RT-ScFv表达载体,并获得了高效表达.
4D12、单链抗体、蛋白表达、蓖麻毒素
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Q786(基因工程（遗传工程）)
2010-06-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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