猪圆环病毒2型Cap蛋白间接ELISA诊断方法的建立和应用

摘要：

以纯化的原核表达的猪圆环病毒2型(PCV-2)重组结构蛋白(rCap蛋白)为包被抗原,建立PCV-2间接ELISA诊断方法;对抗原最适包被浓度、待检血清稀释浓度、重组抗原包被条件、封闭液的筛选、阴阳性临界值等条件进行了优化;对优化后的ELISA检测方法进行特异性试验、临床应用试验;组装试剂盒并进行试剂盒保存期试验.优化反应条件后确定的抗原最适包被浓度为2.815 μg/mL,抗原最佳包被条件为37℃2 h;血清最适稀释度为1:40,酶标抗体最适稀释度为1:500,最佳封闭液为1%BSA;阴阳性临界值判定标准为D<,450nm>≥0.33,判为阳性,D<,450nm><0.33,判为阴性.特异性试验结果表明,只有PCV-2阳性血清反应后的D<,450nm>>0.33,包括抗PCV-1阳性血清在内的其他5种抗血清反应后的D<,450nm><0.33,说明所建立的ELISA方法具有良好的特异性.经对临床疑似PCV-2感染的100份血清样品进行检测,阳性检出率为69%.组装试剂盒在4℃条件下至少可保存12个月以上,说明所建立的诊断方法可以在生产中大量推广应用.本研究成功建立了能特异性检测抗PCV-2血清抗体的ELISA检测方法.

关键词：猪圆环病毒2型、Cap蛋白、间接ELISA、检测、应用、试剂盒

所属期刊栏目：36

分类号：S854.4+3(动物医学（兽医学）)

资助基金：河南省科技攻关项目0624410098

在线出版日期：2009-06-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：53-57