5类等位基因鸡BF2胞外区基因的克隆、可溶性表达和纯化

摘要：

从鸡脾脏中提取总RNA,以总RNA为模板,5'-ATC TAG AGG TAC CGG ATC C-(T)15-3'为反转录引物,采用TaKaRa AMV反转录酶合成First-strand cDNA(fcDNA).根据GenBank中登录的鸡的BF2基因胞外区序列,设计了含EcoR Ⅰ和Hind Ⅲ酶切位点的2对引物,分别扩增鸡BF2的胞外区基因.PCR产物经纯化回收后,插入到含LacZ基因的原核克隆载体pGEM-T Easy中,转化至大肠杆菌JM109感受态细胞,经EcoR Ⅰ和Hind Ⅲ双酶切及PCR鉴定,筛选出阳性克隆.再把所克隆的片段亚克隆到表达载体pMAL-p2X vector,构建重组质粒p2X/BF2(1-5).将重组表达质粒转化入大肠杆菌TB1感受态细胞,筛选阳性克隆,经IPTG诱导表达后,进行聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析.结果表明,本研究克隆了5类鸡BF2的胞外区基因序列,试验结果证明本研究已成功克隆并可溶性表达了5类BF2胞外区蛋白质分子,全长约807～819 bp,编码约269～273个氨基酸.采用淀粉树脂柱亲和层析和DEAE凝胶过滤方法对表达产物进行了纯化,并对纯化的表达产物进行了western blot鉴定.本研究为进一步利用BF2的胞外区在体外构建MHC Ⅰ类分子结合筛选抗原表位肽平台奠定了基础.

关键词：鸡BF2基因、胞外区、pMAL/p2X系统、可溶性表达、纯化、切割

所属期刊栏目：34

分类号：Q785(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金30371098

在线出版日期：2007-11-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：53-57