微小RNA-16对急性心肌梗死大鼠心肌细胞凋亡和炎症反应的影响及其机制研究

摘要：

目的:探讨微小RNA(miR)-16对急性心肌梗死(AMI)大鼠心肌细胞凋亡和炎症反应的影响,并分析其作用机制.方法:选取SPF级雄性SD大鼠80只,采用左前降支(LAD)永久结扎法建立AMI模型.实验分为假手术组(sham组)、急性心肌梗死组(AMI组)、重组腺相关病毒血清型9(rAAV9)-miR-16抑制剂阴性对照组(rAAV9-anti-NC组)、rAAV9-miR-16抑制剂组(rAAV9-anti-miR-16组)、rAAV9-miR-16抑制剂+维甲酸受体相关孤核受体A(RORA)短发夹RNA的阴性对照组(rAAV9-anti-miR-16+sh-NC组)、rAAV9-miR-16抑制剂+RORA沉默的短发夹RNA组(rAAV9-anti-miR-16+sh-RORA组),每组12只.尾静脉注射含miR-16抑制剂、RORA短发夹RNA(sh-RORA)及其阴性对照的腺病毒进行干预,sham组和AMI组经尾静脉注射等体积的生理盐水,注射2周后,超声心动图检测大鼠左心室舒张末期内径(LVEDD)、左心室收缩末期内径(LVESD)、左心室射血分数(LVEF)和左心室短轴缩短分数(LVFS),评估心功能;酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清N末端B型利钠肽原(NT-proBNP)水平、肌酸激酶同工酶(CK-MB)和乳酸脱氢酶(LDH)活性;2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)染色检测心肌梗死面积;苏木素-伊红(HE)染色检测心肌组织病理学变化;TUNEL染色检测心肌组织细胞凋亡率;逆转录定量PCR(RT-qPCR)检测心肌组织miR-16、RORA信使RNA(mRNA)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)mRNA、白细胞介素(IL)-6 mRNA表达水平;免疫蛋白印迹(Western blot)法检测心肌组织半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、裂解的Caspase-3(cleaved-Caspase-3)、B细胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和RORA、TNF-α、核因子(NF)-κB p65蛋白表达.双荧光素酶报告基因实验验证miR-16和RORA之间的靶向关系.结果:敲低miR-16可显著上调AMI大鼠RORA的mRNA和蛋白水平,降低LVEDD、LVESD、血清NT-proBNP水平、CK-MB和LDH活性,升高LVEF、LVFS,改善大鼠心脏功能,并显著减少心肌梗死面积,降低细胞凋亡率、TNF-αmRNA、IL-6 mRNA水平和cleaved-Caspase-3/Caspase-3比值以及Bax、TNF-α、NF-κB p65蛋白水平,升高Bcl-2蛋白水平(P均<0.05),即敲低miR-16可抑制心肌细胞凋亡和炎症反应.在敲低miR-16的基础上,下调RORA可部分阻断miR-16敲低对AMI大鼠心肌损伤的保护作用.双荧光素酶报告基因分析表明,RORA是miR-16的直接靶标.结论:敲低miR-16可能通过上调RORA表达、抑制TNF-α表达及NF-κB p65核转位,进而抑制AMI大鼠的心肌细胞凋亡和炎症反应,改善心脏功能.

关键词：微小RNA-16、急性心肌梗死、炎症反应、维甲酸受体相关孤核受体A、肿瘤坏死因子α、核因子-κB

所属期刊栏目：37

分类号：R54(心脏、血管（循环系）疾病)

资助基金：海南省自然科学基金面上项目820MS154

在线出版日期：2022-11-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：1048-1057