核糖核酸干扰基质金属蛋白酶-3基因对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

摘要：

目的：研究靶向大鼠基质金属蛋白酶-3基因的小干扰核糖核酸（siRNA）对血管平滑肌细胞增殖的影响。
<br>　　方法：构建靶向自发性高血压大鼠基质金属蛋白酶-3（MMP-3）的三对核糖核酸（RNA）干扰序列。将体外培养的血管平滑肌细胞随机分为对照组、Lipofectamine 2000（转染试剂）组、MMP-3-siRNA-1组、MMP-3-siRNA-2组、MMP-3-siRNA-3组，以Lipofectamine 2000分别转染血管平滑肌细胞，48 h后，以实时定量聚合酶链反应（PCR）检测血管平滑肌细胞MMP-3信使核糖核酸（mRNA）的表达水平，筛选干扰效率最高的siRNA作为实验对象。血管平滑肌细胞随机分为4组：对照组、血小板源生长因子（PDGF）组、Lipofectamine 2000+PDGF组及MMP-3-siRNA-1+PDGF组；用siRNA转染体外培养的血管平滑肌细胞，以四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法检测血管平滑肌细胞增殖。
<br>　　结果：实时定量PCR显示，三对互补干扰片段均有不同程度的干扰效果，与对照组比较，MMP-3-siRNA-1组、MMP-3-siRNA-2组和MMP-3-siRNA-3组的mRNA水平明显降低，分别降低了81%、64%和22%。以MMP-3-siRNA-1组的干扰效率最高。蛋白免疫印迹法分析结果亦显示MMP-3-siRNA-1组的干扰效率最高。四甲基偶氮唑盐比色法检测吸光度值结果显示，与PDGF组相比，MMP-3-siRNA-1+PDGF组转染能显著降低PDGF诱导血管平滑肌细胞增殖的吸光度值，抑制率为36.1％（P<0.05），差异有统计学意义。
<br>　　结论：靶向MMP-3基因siRNA序列，能显著降低平滑肌细胞MMP-3 mRNA和蛋白水平，抑制细胞增殖。靶向MMP-3基因干扰RNA可能成为血管增殖性疾病治疗的新靶点。

关键词：基质金属蛋白酶-3、血管平滑肌细胞、RNA干扰、增殖

分类号：R541(心脏、血管（循环系）疾病)

资助基金：郑州市科技攻关计划项目12PPTSF312-3

在线出版日期：2015-03-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：159-163