猪小肠黏膜下层细胞外基质促进肝细胞活力和功能基因表达的研究
目的 探讨猪小肠黏膜下层细胞外基质(porcine small intestinal submucosa extracellular matrix,PSISM)对肝细胞活力及相关基因表达的调控,为PSISM应用于肝脏组织工程提供实验依据.方法 实验分为两部分.①取PSISM添加至含10％FBS的H-DMEM培养基中,制备终浓度为50、100、200 μtg/mL的PSISM培养基;将大鼠肝细胞系BRL细胞分别用以上浓度PSISM培养基培养(A1、B1、C1组),以单纯H-DMEM培养基培养作为对照(D1组).②取PSISM溶解于含0.1 mol/L NaOH的PBS无菌溶液中,调整溶液浓度为1％、2％、3％,制备PSISM凝胶;将BRL细胞分别接种于以上浓度PSISM凝胶进行培养(A2、B2、C2组),鼠尾Ⅰ型胶原凝胶作为对照(D2组).培养后第1、3、5天,采用Live/Dead荧光染色观察细胞形态及存活情况,细胞增殖-毒性检测试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)检测细胞活力,实时荧光定量PCR检测肝细胞特异基因白蛋白(albumin,ALB)、细胞角蛋白18 (cytokeratin 18,CK18)和甲胎蛋白(alpha-fetoprotein,AFP)的表达.结果 Live/Dead荧光染色显示各组细胞均存活良好.细胞活力检测显示,PSISM培养基培养后,第5天C1组吸光度(A)值显著高于D1组(P＜0.05),其余各时间点各组间比较差异均无统计学意义(P＞0.05);PSISM凝胶培养后,A2、B2、C2组第3天和第5天A值显著高于D2组(P＜0.05),A2组第5天A值显著高于B2、C2组(P＜0.05),其余各时间点各组间比较差异均无统计学意义(P＞0.05).实时荧光定量PCR检测显示,A1、B1、C1组ALB、CK18基因相对表达量较D1组显著增高(P＜0.05)、AFP基因相对表达量降低(P＜0.05),C1组CK18基因相对表达量显著低于A1、B1组(P＜0.05);A2、B2、C2组ALB、CK18基因相对表达量较D2组显著增高(P＜0.05)、AFP基因相对表达量降低(P＜0.05),A2组CK18基因相对表达量显著高于B2组(P＜0.05)、AFP基因相对表达量显著低于C2组(P＜0.05).其余各组间各基因相对量表达比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 PSISM无毒性,对肝细胞有良好相容性,能促进肝细胞活力和功能基因表达,有望作为细胞培养添加物或细胞移植载体用于肝脏组织工程.
肝脏组织工程、肝细胞、猪小肠黏膜下层、细胞外基质、凝胶
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R3 ;R65
四川省科技支撑计划资助项目2013SZ0088.Key Project of Science and Technology Bureau of Sichuan Province 2013SZ0088
2017-06-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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