miR-93-5p靶向调控Smad5表达抑制小鼠C3H10T1/2细胞成骨分化的研究

摘要：

目的 探讨miR-93-5p是否通过靶向调控其预测靶基因Smad5的表达,从而抑制小鼠MSCsC3H10T1/2细胞的成骨分化.方法 构建Smad5 3'-UTR-荧光素酶报告载体(pmiR-RB-REPORTTM),通过双荧光素酶报告基因检测,观察miR-93-5p对Smad5 3'-UTR荧光素酶活性的影响,鉴定Smad5是否为miR-93-5p的靶基因.将miR-93-5p mimics(M组)与miR-93-5p inhibitor(In组)及其对应的阴性对照组miR-93-5p mimics阴性对照(MC组)与miR-93-5p inhibitor阴性对照(InC组)分别转染至C3H10T1/2细胞中,并进行成骨诱导培养,48 h后分别采用实时荧光定量PCR (real-time fluorescent quantitative PCR,qRT-PCR)及Westemblot检测各组细胞Smad5在mRNA及蛋白水平的相对表达量;14d后通过茜素红染色检测各组细胞外钙盐的沉积情况,了解miR-93-5p对C3H10T1/2细胞成骨分化的调控效应.结果 双荧光素酶报告基因检测结果显示,miR-93-5p能与Smad5 mRNA3'-UTR特异性结合,抑制其荧光素酶活性(p＜0.05).qRT-PCR检测示,M组及In组Smad5的mRNA相对表达量与对应阴性对照组MC组及InC组比较差异均无统计学意义(P＞0.05);Western blot检测示,M组及In组Smad5蛋白相对表达量与对应阴性对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.05),其中M组较MC组表达量下调,而In组则较InC组表达量上调.茜素红染色示,M组钙盐沉积较MC组明显减少,而In组则较InC组钙盐沉积明显增多.结论 Smad5是miR-93-5p的靶基因,miR-93-5p可通过靶向调控Smad5的表达,抑制小鼠C3H10T1/2细胞成骨分化.

关键词：C3H10T1/2细胞、miR-93-5p、Smad5、MSCs、成骨分化、小鼠

所属期刊栏目：29

分类号：R780.2;B842.6;R392

在线出版日期：2015-11-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1288-1294