人体外泌汗腺细胞的三维培养及形态学观察
目的 探讨人体外泌汗腺组织体外三维培养方法,并对构建的三维组织进行形态学分析. 方法 取整形手术患者自愿捐赠的正常腹部全层皮肤,经Ⅱ型胶原酶消化分离人体外泌汗腺组织,以含5 ng/mL重组人EGF、25 mg/mL牛垂体提取物、100 U/mL青霉素和100 μg/mL链霉素的无血清角质细胞培养基进行培养.倒置相差显微镜下观察细胞生长情况.待原代细胞达80％融合后,调整细胞浓度至1×105个/mL:取0.3 mL细胞悬液与0.3 mL Matrigel基底膜基质混匀培养,倒置相差显微镜下观察细胞生长情况.培养14 d后,取标本行冰冻切片,HE染色观察细胞形态结构,免疫组织化学染色检测细胞角蛋白7 (cytokeratin 7,CK7)和CK19抗原表达. 结果 倒置相差显微镜观察示,经Ⅱ型胶原酶消化后大量汗腺组织游离;贴壁后3～5 d长出汗腺细胞,细胞持续分裂达2～3周,形成围绕汗腺组织块的环状单层;3～4周后细胞衰老.汗腺细胞接种于Matrigel基底膜基质中2～3 d,细胞开始分裂,随后形成小细胞团、管状结构以及类球状结构:约2周时混合培养物开始液化,培养终止.HE染色示部分细胞形成中空管状结构,管壁由1～2层细胞构成,类似于在体汗腺的分泌部和导管部;免疫组织化学染色见培养的汗腺细胞CK7和CK19表达均呈阳性. 结论 人汗腺细胞接种于Matrigel基底膜基质三维培养,形成的组织结构模拟了在体汗腺的组织形态结构.
人汗腺细胞、Matrigel基底膜、三维培养、类汗腺结构
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National Natural Science Foundation of China81071551;2010 High-leveled Talents in Universities of Guangdong Province;国家自然科学基金资助项目81071551;2010年广东省高等学校高层次人才项目
2014-03-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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