福建道地药材枇杷叶ISSR反应体系的建立与优化

摘要：

目的 建立适于福建产枇杷叶的ISSR分析的PCR反应体系,筛选适宜引物,并确定最佳退火温度.方法 改良的CTAB法提取嫩叶中DNA,通过单因子实验分别找出合适的ISSR-PCR反应条件,利用梯度PCR确定引物最佳退火温度.结果 适于枇杷叶ISSR最佳的反应体系为:总反应体积为25μL,其中模板DNA 60 ng,Taq DNA聚合酶0.9 U,引物浓度0.4μmol·L-1,dNTP浓度200 μmol.L-1,10×Buffe(含Mg2+) 2.5 μL,加入灭菌去离子水至25 μL.扩增程序为:预变性94℃7 min,变性94℃1min,复性最佳退火温度1min,延伸72℃1 min,35个循环,72℃延伸10 min.在100条引物中筛选出14条扩增条带清晰且条带数目较多的引物,最佳退火温度为48～58℃(因引物不同而异).结论 建立了枇杷叶ISSR最佳反应体系,筛选出14条引物并确定了最佳退火温度,为应用ISSR技术鉴定枇杷叶的种质资源和遗传多样性研究奠定了基础.

关键词：枇杷叶、简单重复间隔序列、反应体系、优化

所属期刊栏目：29

分类号：R282.2(中药学)

资助基金：福建省卫生厅中医药科研课题WZZd0902

在线出版日期：2012-08-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：315-319