重组人内皮抑素在大肠杆菌中表达及其生物学活性鉴定

摘要：

目的利用大肠杆菌原核表达系统表达重组人内皮抑素Endostatin,并对其进行生物学活性鉴定.方法采用RT-PCR方法从人胚肝中钓取人内皮抑素cDNA,将其克隆入pGEM-T Easy 克隆载体中;经全自动序列分析仪测序确证后,将人内皮抑素cDNA亚克隆入原核表达载体pWR450-1,构建含人内皮抑素cDNA的重组质粒;将该重组质粒转化入大肠杆菌TG1中进行诱导表达,表达产物经SDS-PAGE鉴定;表达产物初步纯化复性后以鸡胚尿囊膜血管生成抑制实验和小鼠伤口愈合实验对其进行生物学活性鉴定.结果成功获得549bp人 endostastin 基因,测序证实序列正确.经IPTG诱导的重组原核表达质粒表达出重组人内皮抑素的融合蛋白,此蛋白在SDS-PAGE凝胶上显示出一条约75KD的阳性条带.重组人内皮抑素融合蛋白的初纯物在体外能抑制鸡胚尿囊膜血管生成及延长小鼠伤口愈合时间.结论人内皮抑素融合蛋白在大肠杆菌原核表达系统中高水平表达,并具有抗血管生成活性,为采用抗血管生成方法治疗恶性实体肿瘤的研究奠定了基础.

关键词：人内皮抑素、逆转录聚合酶链反应、原核表达系统、鸡胚尿囊膜

所属期刊栏目：20

分类号：R318(医用一般科学)

资助基金：湖南省教育厅科研项目No:99C202;湖南省卫生厅科研项目4-01-WJ-2001-Y055

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：85-88