10.3969/j.issn.1005-8982.2016.18.004
人致病性呼肠孤病毒M3编码蛋白纯化及多克隆抗体制备
目的:根据构建的人致病性纳尔逊海湾病毒(NBVs)M3基因片段质粒,纯化融合蛋白制备NBVs M3多克隆抗体。方法利用构建的纳尔逊海湾病毒(NBVs)M3基因质粒Pris His MB- M3,转化至大肠埃希菌(E. coil)BL21(DE3)感受态细胞中,异丙基-β- D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白表达,产物经过镍柱亲和层析法获得Pris His MB- M3融合蛋白;将纯化的融合蛋白作为抗原免疫家兔,获得NBVs M3多克隆抗体;蛋白免疫印迹检测(Western blot)蛋白准确性以及多克隆抗体抗性。结果 SDS- PAGE电泳考马斯亮蓝染色检测显示:25℃、IPTG 浓度为0.3 mmol/L,诱导12 h,Pris His MB- M3融合蛋白表达量最高;在咪唑浓度为MCAC-20、MCAC-40条件时洗脱下目的蛋白。用纯化的融合蛋白免疫家兔制备抗体,Western blot验证成功制备出NBVs M3多克隆抗体。结论成功获得了灵敏性及特异性较高的纳尔逊海湾病毒(NBVs)M3多克隆抗体,为进一步研究该病毒的致病性提供了很高的应用价值。
Pris His MB-M3质粒、纳尔逊海湾病毒(NBVs)、纯化蛋白、多克隆抗体
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R373.3(医学微生物学(病原细菌学、病原微生物学))
辽宁医学院领军人物人畜共患病创新团队;研究生科技创新项目
2016-10-12(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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