PD-L1基因实时荧光定量RT-PCR法的建立及在大鼠肝移植中的应用

摘要：

目的 建立real-time RT-qPCR(实时荧光定量RT-PCR)检测大鼠PD-L1的方法,应用该方法检测大鼠移植肝中PD-L1 mRNA的水平.方法 两袖套法复制大鼠肝移植耐受组(BN→BN)及排斥组( LEW→BN)模型,术后7d处死受体,检测肝功能ALT和AST水平,HE染色病理分析排斥程度,Trizol法提取移植肝总RNA并反转录为cDNA;选β-actin作为内参,复制SYBR Green I real-time RT-qPCR检测法.利用该方法检测移植肝中PD-L1和β-actin的初始模板量,PD-L1/β-actin计算PD-L1 mRNA的相对表达量.结果 异基因LEW→BN组出现急性排斥反应,ALT、AST排斥组均高于耐受组(均P＜0.05).RAI评分排斥组高于耐受组(均P ＜0.05).PD-L1扩增效率为98.8％,相关系数为0.996；溶解曲线为特异单峰；变异系数小于2.0％；移植肝中PD-L1 mRNA相对表达为耐受组[(0.95±0.10)×10-2]高于排斥组[(0.81±0.09)×10-2],差异有统计学意义(t=2.62,P=0.026).结论 成功建立了大鼠源PD-L1的real-time RT-qPCR检测方法,耐受组PD-L1的高表达提示其可能有利于大鼠移植肝的存活,为研究肝移植免疫耐受奠定了理论基础.

关键词：肝移植、PD-L1、实时荧光定量RT-PCR、SYBR Green I

所属期刊栏目：22

分类号：R392.4;R392.32

资助基金：国家自然科学基金30960342;新疆维吾尔自治区高技术研究与发展计划项目200810104;新疆包虫病基础医学重点实验室开放课题资助项目XJDX0202-2008-05

在线出版日期：2012-05-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

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