FAAP的原核表达、纯化与抗体制备

摘要：

目的 构建pET28a-FAAP-His原核表达载体,表达His-FAAP融合蛋白,制备FAAP蛋白的多克隆抗体.方法 构建pET28a-FAAP-His原核表达载体,转化到大肠杆菌BL21中并诱导表达His-FAAP融合蛋白,用纯化的FAAP蛋白免疫昆明小白鼠后,制备多克隆抗体,通过Western blotting检验抗血清的特异性和灵敏性.结果 成功构建pET28a-FAAP-His原核表达栽体.在大肠杆菌BL21中经1mM的异丙基-β -D-硫代半乳糖苷(isopropy-β -D-thiogalactoside,IPTG)37℃诱导4h后,融合蛋白有很高水平的表达.Western blotting结果显示FAAP抗体能够有效地检测人血管内皮脐静脉细胞内FAAP蛋白的表达.结论 成功地对FAAP进行了原核表达、纯化,抗FAAP小鼠的多克隆抗体具有较好的特异性,为进一步研究FAAP的结构与功能奠定了坚实的基础.

关键词：小鼠FAAP基因、原核表达、蛋白纯化、western blotting、多克隆抗体

所属期刊栏目：21

分类号：Q71(生物大分子的结构和功能)

资助基金：国家自然科学基金面上项目30400039;青年项目30800088;全国大学生创新性课题项目YA09048

在线出版日期：2011-12-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：3082-3086,3090