10.3969/j.issn.1005-8982.2010.21.010
自杀基因TK腺相关病毒载体的构建及其抑制肿瘤细胞的功能研究
目的 探讨腺相关病毒(rAAV)-单纯疱疹病毒胸苷激酶基因(herpes simplex virus thymidine kinase,HSV-TK)(简称rAAV-TK)载体的构建及其生物学效应的初步鉴定.方法 用PCR扩增TK序列至pAAV-MCS载体,构建pAAV-TK;采用AAV-Helper Free System包装系统、"氯仿-PEG/NaCl沉淀-氯仿抽提"及冰乙醇沉淀法进行AAV的包装、纯化和浓缩,对病毒颗粒进行鉴定;用MB49-PSA细胞对rAAV-TK生物学效应进行初步鉴定.结果 成功构建pAAV-TK载体,并经酶切、PCR及测序验证其准确性;rAAV病毒颗粒滴度达2×1010v.p/mL,浓缩后可达到2 × 1011~2×1012v.p/mL;rAAV-TK可以分泌TK基因,加入药物更昔洛韦(Ganciclovir,GCV)和吉地他滨(Gemcitabine,GVC),该基因能有效诱导膀胱肿瘤细胞MB49-PSA凋亡.结论 成功构建rAAV-TK腺相关病毒,体外实验表明rAAV-TK/GVC/GCV系统能高效诱导膀胱肿瘤细胞的凋亡.
腺相关病毒、单纯疱疹病毒胸苷激酶基因、膀胱肿瘤、更昔洛韦、吉地他滨
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R737.14(肿瘤学)
国家自然科学基金30872559;98802-5336
2011-03-30(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
3240-3244