白藜芦醇激活沉默信息调节子1抑制NLRP3炎症小体对脓毒症肠道黏膜屏障功能损伤的研究

摘要：

目的:探讨白藜芦醇（RSV）能否通过激活沉默信息调节子1（SIRT1）调控NOD样受体蛋白3（NLRP3）炎症小体活化，进而改善脓毒症肠道炎症反应及细胞凋亡，从而发挥肠道屏障功能保护作用。方法:①体外实验：培养人结直肠腺癌细胞（Caco-2），并分为正常组（完全培养基培养48 h），脂多糖（LPS）组（完全培养基培养24 h后加入2 mg/L的LPS处理12 h），RSV低、中、高浓度组及SIRT1抑制剂（EX-527）组（完全培养基培养24 h后加入2 mg/L的LPS处理6 h，随后再分别加入RSV 10、20、40 μmol/L或EX-527 10 μmol/L处理6 h）。采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测细胞上清液中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素（IL-6、IL-18、IL-1β）等炎性因子水平；用流式细胞仪检测细胞凋亡水平；用蛋白质免疫印迹试验（Western blotting）检测NLRP3、SIRT1、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶1（caspase-1）及凋亡相关点样蛋白（ASC）的蛋白表达。②体内实验：将24只雄性Wistar大鼠按随机数字表法分为假手术（Sham）组、盲肠结扎穿孔术（CLP）6 h组、CLP 24 h组及RSV干预组（CLP术后6 h、12 h腹腔注射RSV 20 mg/kg），每组6只。采用免疫组化法检测大鼠肠道中NLRP3、caspase-1及ASC表达情况。结果:①与正常组比较，经LPS处理后细胞上清液中炎性因子水平升高，SIRT1蛋白表达降低，NLRP3、caspase-1及ASC蛋白表达升高。与LPS组相比，不同浓度RSV可降低炎性因子水平，增加SIRT1活性，抑制NLRP3炎症小体下游产物caspase-1、ASC的表达，其中40 μmol/L高浓度RSV作用最为明显〔TNF-α（ng/L）：8.77±0.43比12.66±0.81，IL-6（ng/L）：1.35±0.20比1.93±0.09，IL-1β（ng/L）：1.05±0.04比1.31±0.07，IL-18（ng/L）：519.50±11.16比622.70±30.69，SIRT1/β-actin：0.80±0.05比0.58±0.02，caspase-1/β-actin：0.55±0.06比0.78±0.06，ASC/β-actin：0.78±0.08比1.04±0.15，均
P<0.05〕，而SIRT1抑制剂EX-527的作用则相反。正常组、LPS组及RSV低、中、高浓度组和EX-527组间细胞凋亡率差异并无统计学意义〔（7.03±0.57）%、（9.67±0.55）%、（9.57±0.70）%、（9.30±2.15）%、（9.87±0.97）%、（9.07±0.93）%，
F＝2.590，
P＝0.082〕。②免疫组化结果显示，相比Sham组，CLP 6 h组、CLP 24 h组及RSV干预组大鼠肠道上皮细胞中NLRP3炎症小体及下游产物caspase-1、ASC表达增加。而RSV干预组肠道上皮中ASC表达的阳性面积所占百分比较CLP 6 h组显著减少〔（15.22±2.73）%比（19.88±2.67）%，
P<0.05〕，NLRP3及caspase-1表达的阳性面积所占百分比较CLP 24 h组显著减少〔（9.31±1.37）%比（13.19±1.92）%，（19.57±3.92）%比（27.28±6.33）%，均
P<0.05〕。
结论:在体内及体外脓毒症肠道损伤模型中，高浓度RSV可通过激活SIRT1抑制NLRP3炎症小体活化，进而降低下游caspase-1及ASC的表达，发挥抑制炎性因子分泌减轻炎症反应的作用。

关键词：脓毒症、肠道、NLRP3炎症小体、沉默信息调节子1、白藜芦醇

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资助基金：新疆维吾尔自治区高校科研计划项目XJEDU2018I011;University Research Program Foundation of Xinjiang Uygur Autonomous Region of ChinaXJEDU2018I011

在线出版日期：2023-05-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：535-540