内皮Adora2b活化可减轻脂多糖诱导的肺微血管内皮炎症

摘要：

目的 探讨内皮低亲和力A2b腺苷受体(Adora2b)对脂多糖(LPS)诱导肺微血管内皮炎症的调控作用及机制.方法 原代培养大鼠肺微血管内皮细胞(PMVEC),血清饥饿24 h后,采用Adora2b特异性激动剂BAY60-6583(0.1、1、10μmol/L)或抑制剂PSB1115(1μmol/L)预处理1 h,然后再加入LPS(100μg/L);同时设立空白对照组、LPS组、BAY60-6583单独处理组和PSB1115单独处理组.各组细胞培养24 h后,采用膜联蛋白V/碘化丙啶(Annexin V/PI)双染色法检测早期细胞凋亡率,用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定细胞上清液中炎性因子含量,用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)测定趋化因子和黏附分子的mRNA表达;分离提取大鼠静脉血中性粒细胞(PMN),观察体外PMN黏附迁移情况,用异硫氰酸荧光素-白蛋白(FITC-albumin)法检测PMN黏附迁移后PMVEC单层通透性,用荧光探针DCFH-DA检测细胞内氧化应激水平.结果 与空白对照组相比,LPS组早期细胞凋亡率明显升高,上清液中早期炎性因子白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量明显增加,趋化因子如CXC基序趋化因子配体1(CXCL-1)、CXC基序趋化因子配体3(CXCL-3)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)以及黏附分子如E-选择素、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)的mRNA表达均明显升高,黏附迁移的PMN增多,PMVEC单层通透性升高,细胞内活性氧水平升高.与LPS组比较,BAY60-6583预处理能剂量依赖性地降低早期细胞凋亡率,减少PMN迁移,降低PMVEC单层通透性,0.1μmol/L时差异即有统计学意义〔凋亡率:(21.12±2.12)％ 比(27.66±3.57)％,PMN迁移细胞数(个/HP):260.60±18.24比290.20±16.48,通透系数(Pd,×10-6 cm/s):28.28±2.04比32.55±2.13,均P<0.05〕,并能剂量依赖性减少早期促炎因子分泌,降低趋化因子和黏附分子的mRNA表达,1μmol/L时差异均有统计学意义〔IL-1β(ng/L):475.75±63.15比755.25±67.42,TNF-α(ng/L):560.25±69.96比818.75±60.92,CXCL-1 mRNA(2-ΔΔCt):3.57±0.28比5.27±0.69,CXCL-3 mRNA(2-ΔΔCt):4.56±0.48比7.32±0.54,MCP-1 mRNA(2-ΔΔCt):2.21±0.31比3.35±0.21,E-选择素mRNA(2-ΔΔCt):4.64±0.09比7.28±0.73,ICAM-1 mRNA(2-ΔΔCt):4.14±0.30比5.89±0.25,VCAM-1 mRNA(2-ΔΔCt):2.23±0.19比2.92±0.33,均P<0.05〕,10μmol/L BAY60-6583预处理还能降低细胞内氧化应激水平〔活性氧(荧光强度):629.05±33.10比781.45±64.59,P<0.05〕;而PSB1115预处理能进一步增加LPS诱导的细胞凋亡〔凋亡率:(34.36±4.57)％比(27.66±3.57)％〕,上调炎性因子和趋化因子、黏附分子的表达〔IL-1β(ng/L):889.00±63.11比755.25±67.42,TNF-α(ng/L):939.00±43.44比818.75±60.92,CXCL-1 mRNA(2-ΔΔCt):6.66±0.65比5.27±0.69,CXCL-3 mRNA(2-ΔΔCt):10.42±0.51比7.32±0.54,MCP-1 mRNA(2-ΔΔCt):4.85±0.34比3.35±0.21,E-选择素mRNA(2-ΔΔCt):8.42±0.47比7.28±0.73,ICAM-1 mRNA(2-ΔΔCt):7.46±0.72比5.89±0.25,VCAM-1 mRNA(2-ΔΔCt):4.35±0.26比2.92±0.33〕,并能增加PMN黏附迁移(个/HP:348.40±22.68比290.20±16.48)及PMVEC单层通透性〔Pd(×10-6 cm/s):39.65±2.69比32.55±2.13〕,加重氧化应激损伤〔活性氧(荧光强度):847.04±29.26比781.45±64.59〕,差异均有统计学意义(均P<0.05).结论 内皮Adora2b活化可通过减少早期炎性因子释放、下调细胞趋化和黏附分子表达、减少PMN黏附迁移、降低氧化应激等机制减轻LPS诱导的肺微血管内皮炎症.

关键词：急性呼吸窘迫综合征、A2b腺苷受体、肺微血管内皮、炎症

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资助基金：北京市自然科学基金;Beijing Municipal Natural Science Foundation of China

在线出版日期：2020-03-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1485-1490