普通肝素对高迁移率族蛋白B1介导血管内皮钙黏蛋白表达的影响

摘要：

目的 观察高迁移率族蛋白B1(HMGB1)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)屏障通透性的损伤及普通肝素(UFH)的保护作用,探讨UFH对HMGB1介导的血管内皮钙黏蛋白(VE-cadherin)表达下调的保护机制.方法 体外培养HUVEC并传代,待细胞融合生长至80%时随机分为4组:磷酸盐缓冲液(PBS)对照组(200 μL PBS)、重组人高迁移率族蛋白B1(rhHMGB1)处理组(100 μg/L rhHMGB1)、UFH对照组(10 kU/L UFH)、UFH预处理组(10 kU/L UFH+100 μg/L rhHMGB1).各组细胞经不同处理24 h后,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定内皮细胞活性,采用Transwell法测定内皮细胞通透性,采用免疫荧光法观察VE-cadherin的表达及分布,采用蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)测定VE-cadherin及磷酸化p38丝裂素活化蛋白激酶(p-p38MAPK)的蛋白表达.结果 经100 μg/L的rhHMGB1处理24 h后,内皮细胞活性与PBS对照组差异无统计学意义(A值:0.230±0.004比0.255±0.006,P＞0.05),但内皮细胞通透性显著升高(葡聚糖FD40荧光强度:11.05±0.12比6.34±0.39,P＜0.05);与PBS对照组比较,荧光显微镜下显示rhHMGB1处理组VE-cadherin膜定位减少,分布松散,细胞间出现明显裂隙,定量分析显示VE-cadherin蛋白表达明显下降(VE-cadherin/β-actin:0.16±0.04比0.31±0.03,P＜0.05),p-p38MAPK蛋白表达明显升高(p-p38MAPK/β-actin:0.79±0.03比0.26±0.05,P＜0.05).UFH预处理可对HMGB1介导的内皮细胞损伤起保护作用,表现为细胞通透性明显降低(葡聚糖FD40荧光强度:9.11±0.23比11.05±0.12),VE-cadherin荧光表达明显增强,膜定位明显增加,定量分析显示VE-cadherin的蛋白表达明显上调(VE-cadherin/β-actin :0.24±0.02比0.16±0.04),且p38MAPK的磷酸化水平明显降低(p-p38MAPK/β-actin :0.54±0.05比0.79±0.03),与rhHMGB1处理组比较差异均有统计学意义(均P＜0.05).PBS对照组与UFH对照组各项指标比较差异均无统计学意义.结论 UFH可保护HMGB1所致的VE-cadherin表达减少和分布异常,进而保护内皮细胞屏障通透性,其作用机制可能与UFH抑制p38MAPK的磷酸化相关.

关键词：脓毒症、高迁移率族蛋白B1、普通肝素、血管内皮钙黏蛋白

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资助基金：国家自然科学基金81471898 Fund program: National Natural Science Foundation of China 81471898

在线出版日期：2019-09-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：842-846