利伐沙班对内毒素干扰人脐静脉内皮细胞损伤的影响

摘要：

目的 探讨凝血因子Ⅹa(FⅩa)抑制剂利伐沙班对内毒素诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)损伤的作用及其机制.方法 体外培养HUVEC,待细胞生长至80%融合时,按随机数字表法分为4组:空白对照组(DMEM培养基)、脂多糖(LPS)组(100 μg/L LPS培养16 h)、FⅩa+LPS组(100 nmol/L FⅩa预处理24 h后加入LPS)、FⅩa+RIV+LPS组(100 nmol/L FⅩa+1 μmol/L利伐沙班预处理24 h后加入LPS).各组细胞处理后用CCK-8细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒检测细胞活性,用细胞划痕实验检测细胞迁移能力,用流式细胞仪检测细胞凋亡情况,用Transwell小室法及伊文思蓝检测单层内皮细胞屏障通透性,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL-1β、IL-6)水平,用蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测细胞核转录因子- κB(NF-κB)和丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)炎症信号通路关键蛋白的表达.结果 与空白对照组比较,LPS组细胞活性降低,细胞迁移能力增加,凋亡细胞增多,单层内皮细胞屏障通透性增加, TNF-α、IL-1β和IL-6等促炎因子分泌增加,炎症信号通路关键蛋白磷酸化c-Jun氨基末端激酶(p-JNK)、磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)、磷酸化转化生长因子激酶1(p-TAK1)和磷酸化NF-κBp65(p-NF-κBp65)表达增加,说明LPS可以刺激血管内皮细胞的炎症反应,从而对细胞活性、凋亡及功能有明显影响.FⅩa+LPS组除IL-6水平显著高于LPS组外,其他指标与LPS组比较差异均无统计学意义.与FⅩa+LPS组比较,FⅩa+RIV+LPS组细胞活性明显提高(A值:0.42±0.02比0.33±0.02),细胞迁移能力明显下降(倍:1.78±0.17比2.24±0.20),凋亡细胞明显减少〔(11.30±0.70)%比(21.03±0.19)%〕,单层内皮细胞通透性明显降低〔(149±12)%比(253±15)%〕,炎性因子水平明显降低〔IL-1β(ng/L):163.2±20.7比477.8±20.2,IL-6(ng/L):69.3±0.5比238.0±24.1,TNF-α(ng/L):117.0±13.1比196.2±4.5),炎症信号通路中p-TAK1和p-NF-κBp65蛋白表达水平明显降低(p-TAK1/TAK1 :0.74±0.09比1.85±0.15,p-NF-κBp65/NF-κBp65 :1.15±0.17比2.36±0.20),差异均有统计学意义(均P＜0.05);而p-JNK和p-p38MAPK蛋白表达水平差异无统计学意义(p-JNK/JNK:1.64±0.12比1.65±0.15,p-p38MAPK/p38MAPK :2.31±0.32比2.35±0.20,均P＞0.05).结论 利伐沙班可以有效缓解内毒素刺激HUVEC的炎症反应,其作用机制可能与抑制NF-κB信号通路激活而非MAPK信号通路有关.

关键词：利伐沙班、血管内皮细胞、内毒素、核转录因子-κB、丝裂素活化蛋白激酶

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资助基金：上海市科学技术委员会科研计划项目18140903400 Fund program: Shanghai Science and Technology Planning Project 18140903400

在线出版日期：2019-07-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：468-473