慢病毒介导的BAG-1L基因对缺氧状态下人神经母细胞瘤细胞的保护作用

摘要：

目的 探讨慢病毒介导Bcl-2结合抗凋亡基因1L(BAG-1L)过表达对缺氧/复氧诱导人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)损伤的保护作用,研究其对磷酸肌醇-3激酶/丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶(PI3K/AKT)通路的影响.方法 体外培养SH-SY5Y细胞,取对数生长期细胞分为重组慢病毒感染组(感染携带BAG-1L基因及荧光蛋白基因的重组慢病毒)、载体对照组(感染携带荧光蛋白基因但不携带BAG-1L基因的慢病毒)及细胞对照组(未感染慢病毒).感染48 h后采用蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测靶细胞BAG-1L的表达;3组细胞经缺氧8 h/复氧24h处理后,采用CCK-8细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒检测细胞活性;采用别藻蓝蛋白标记的膜联蛋白V/7-氨基放线菌素D(Annexin V-APC/7-AAD)双染法检测细胞凋亡,并进行流式分析;采用Western Blot试验检测细胞BAG-1L、热休克蛋白70(HSP70)、AKT及磷酸化AKT(p-AKT)的蛋白表达.结果 重组慢病毒感染48 h后可观察到外源性BAG-1L特异性蛋白条带,而细胞对照组和载体对照组无此特异性蛋白条带.经缺氧/复氧处理后,重组慢病毒感染组细胞活性较细胞对照组和载体对照组均明显增高(A值:0.689±0.036比0.425±0.013、0.400±0.012),细胞凋亡明显减少[凋亡率:(26.97±1.82)％比(36.60±1.45)％、(35.77±3.74)％],BAG-1L、HSP70、p-AKT蛋白表达水平明显升高[BAG-1L蛋白(灰度值):2.405 ±0.167比0.529±0.141、0.601 ±0.099,HSP70蛋白(灰度值):0.997±0.123比0.634±0.091、0.584±0.106,p-AKT蛋白(灰度值):1.234±0.118比0.661±0.210、0.712±0.199,均P＜0.01];而AKT蛋白表达虽高于细胞对照组和载体对照组(灰度值:1.103±0.269比0.646±0.188、0.791±0.326),但差异无统计学意义(均P＞0.05).细胞对照组和载体对照组各指标比较差异无统计学意义(均P＞0.05).结论 慢病毒介导的BAG-1L基因过表达可以保护神经细胞抵抗缺氧引起的损伤,抑制细胞凋亡,其保护作用可能与促进PI3K/AKT通路的激活有关.

关键词：Bcl-2结合抗凋亡基因、神经细胞、缺氧/复氧、抗凋亡、PI3K/AKT通路

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分类号：S85;R37

资助基金：National Natural Science Foundation of China 81571938,81501706国家自然科学基金81571938,81501706

在线出版日期：2017-05-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：239-243