微小RNA-1在高糖培养下心肌成纤维细胞致纤维化中的调控作用

摘要：

目的：探讨微小RNA-1（miR-1）在高糖培养下心肌成纤维细胞致纤维化中的作用。方法取1～3日龄SD大鼠心尖组织培养原代成纤维细胞，选用3～4代细胞并随机分为正常糖空病毒组（CON+Lv-Vehicle组）、正常糖miR-1沉默组（CON+Lv-miR1组）、高糖空病毒组（HG+Lv-Vehicle组）、高糖miR-1沉默组（HG+Lv-miR1组）4组，分别置于含葡萄糖5.5mmol/L（正常糖）或25mmol/L（高糖）的DMEM培养基中，并分别接种含miR-1沉默序列的慢病毒或慢病毒载体，于12h后更换新鲜培养基。接种病毒3d后病毒转染效率达90%时，采用实时定量反转录-聚合酶链反应（qRT-PCR）检测miR-1表达，酶联免疫吸附试验（ELISA）检测胶原蛋白Ⅰ和Ⅲ的分泌量，蛋白质免疫印迹试验（WesternBlot）检测胶原蛋白Ⅰ和Ⅲ、基质金属蛋白酶（MMP-2、MMP-9）及自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3B-Ⅱ（LC3B-Ⅱ）、死骨片重组蛋白1（P62/SQSTM1）、组织蛋白酶D（CathepsinD）的蛋白表达。结果与CON+Lv-Vehicle组比较，CON+Lv-miR1组各指标差异均无统计学意义；HG+Lv-Vehicle组miR-1表达明显升高（2-ΔΔCt：1.82±0.17比1.00±0.04），胶原蛋白Ⅰ和Ⅲ的分泌量（mg/L：14.55±0.33比7.28±0.22，157.50±13.22比61.25±8.54）及表达量（灰度值：432.35±56.00比100.00±15.00，320.35±47.00比100.00±15.00）明显升高，MMP-2、MMP-9、LC3B-Ⅱ、P62/SQSTM1蛋白表达明显增高（灰度值：249.0±21.0比100.0±15.0，142.3±20.0比100.0±16.0，178±19比100±14，378.3±20.0比100.0±15.0），而CathepsinD表达明显降低（灰度值：60±14比100±10），差异均有统计学意义（均P＜0.01）。与HG+Lv-Vehicle组比较，HG+Lv-miR1组miR-1表达明显降低（2-ΔΔCt：1.21±0.10比1.82±0.17），胶原蛋白Ⅰ和Ⅲ的分泌量（mg/L：10.68±0.54比14.55±0.33，87.25±13.55比157.50±13.22）及表达量（灰度值：179.41±45.00比432.35±56.00，173.41±50.00比320.35±47.00）明显减少，MMP-2、MMP-9、LC3B-Ⅱ、P62/SQSTM1蛋白表达明显降低（灰度值：172.0±23.0比249.0±21.0，90.0±17.0比142.3±20.0，138±15比178±19，265.0±17.0比378.3±20.0），CathepsinD表达明显升高（灰度值：110±17比60±14），差异均有统计学意义（均P＜0.05）。结论高糖培养下的心肌成纤维细胞可明显上调miR-1表达，miR-1基因沉默对高糖培养下心肌成纤维细胞致纤维化作用具有抑制作用，其机制可能与恢复成纤维细胞自噬流、上调CathepsinD表达、抑制胶原蛋白生成有关。

关键词：高糖损伤、心肌成纤维细胞、纤维化、微小RNA、自噬

所属期刊栏目：28

分类号：R96;R69

资助基金：江苏省自然科学基金面上项目BK20141187；江苏省苏州市科技计划项目SS201613， SYS201473；苏州大学科研预研基金项目SDY2015A18

在线出版日期：2017-03-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：1113-1117