盐酸刺激与机械牵张对人肺上皮细胞 向间质转分化的影响

摘要：

目的：探讨盐酸（HCl）刺激与机械牵张诱导人肺上皮细胞向间质转分化以及对透明质酸（HA）分泌的影响。方法体外培养人肺上皮细胞株BEAS-2B，取对数生长期的细胞分为磷酸盐缓冲液（PBS）+静止组、HCl+静止组、PBS+牵张组、HCl+牵张组。采用FX-5000T细胞应力加载系统向两个牵张组BEAS-2B细胞持续48h施加20%振幅、频率0.33Hz、正弦波的机械牵张。分别于牵张前后用倒置显微镜观察细胞形态变化；用蛋白质免疫印迹试验（WesternBlot）检测细胞上皮标志物E-钙黏蛋白和细胞角蛋白-8（CK-8）以及间质标志物波形蛋白和α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的蛋白表达；用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测细胞培养上清中HA分泌量。结果①镜下观察显示：PBS+静止组BEAS-2B细胞呈卵圆形，且细胞紧密相连，细胞间存在极性；单纯HCl刺激后细胞形态无明显变化；而单纯给予机械牵张48h后细胞由卵圆形变成长梭形，细胞间隙明显增大；给予HCl刺激和机械牵张双重打击后细胞形态改变更为显著。②WesternBlot显示：与PBS+静止组比较，单纯或联合HCl和机械牵张48h后BEAS-2B细胞E-钙黏蛋白、CK-8表达均下调，波形蛋白、α-SMA表达均上调，以HCl+牵张组表达变化更为明显〔以PBS+静止组表达量（灰度值）为基数1，E-钙黏蛋白为0.16±0.08比1，CK-8为0.10±0.03比1，波形蛋白为3.35±0.38比1，α-SMA为3.10±0.45比1，均P＜0.01〕。③ELISA试验显示：与PBS+静止组比较，单纯HCl刺激或机械牵张均可诱导BEAS-2B细胞分泌HA（μg/L：55.763±0.687、63.005±0.493比49.876±1.867）；而HCl与机械牵张联合刺激后细胞培养上清液中HA分泌量增加更为显著（μg/L：78.220±1.085比49.876±1.867，P＜0.01）。结论 HCl或机械牵张均能诱导人肺上皮细胞发生上皮向间质转分化，同时增加HA的分泌量；HCl刺激和机械牵张双重打击可使人肺上皮细胞向间质转分化更为明显，同时进一步增加HA的分泌量。

关键词：机械牵张、上皮间质转分化、透明质酸、肺纤维化、肺上皮细胞

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分类号：R5 ;R54

资助基金：国家自然科学基金81270125；广东省广州市科技计划项目201400000002

在线出版日期：2016-07-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：513-517