神经肽P物质调控Notch信号通路对胎鼠 高氧肺损伤后Ⅱ型肺泡上皮细胞增殖的影响

摘要：

目的：探讨神经肽P物质（SP）对胎鼠高氧肺损伤后Ⅱ型肺泡上皮细胞（AECⅡ）增殖的影响及其可能机制。方法取孕18d胎鼠肺组织进行原代AECⅡ分离培养后分为6组。空气组暴露于含21%的氧舱内；高氧组则暴露于含95%的氧舱内；高氧+SP组、高氧+SP+SP受体拮抗剂L703.606组、高氧+SP+Notch信号通路阻断剂MW167组、高氧+MW167组在高氧暴露基础上相应加入1μmol/L的SP、0.03mmol/L的L703.606、0.2mmol/L的MW167。干预后4h检测细胞活性，于6、12、18、24h计数细胞并描绘增殖曲线，24h于倒置显微镜下观察细胞形态及增殖情况并检测细胞周期；用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应（RT-qPCR）检测Notch信号通路配体Dll1、Dll4以及靶基因Hes1的mRNA表达。结果经高氧或Notch信号通路阻断剂MW167处理后，各组细胞计数均较空气组明显减少，且细胞活性明显降低，出现G1期阻滞现象，细胞增殖能力明显受抑；镜下可见核固缩、胞内颗粒物减少等变化；同时Notch通路相关基因Dll1、Dll4、Hes1的mRNA表达量明显下降。与高氧组比较，SP干预后细胞计数增多，胞内颗粒物质增加，且细胞活性明显升高（A值：75.5±14.9比44.9±8.4），G1期比例降低〔（62.87±3.99）%比（67.47±2.28）%〕、S期比例升高〔（32.54±2.71）%比（25.03±3.52）%〕，说明细胞增殖能力明显增强（均P＜0.05）；同时Dll1、Dll4、Hes1的mRNA表达量均明显上调（2-ΔΔCt：1.44±0.13比0.92±0.04，0.80±0.17比0.35±0.08，1.20±0.09比0.85±0.08，均P＜0.05）。而此时再加入SP受体拮抗剂L703.606或Notch信号通路阻断剂MW167，可再次出现细胞增殖受抑的表现，且细胞活性再次降低（A值：60.0±9.5、37.7±21.7比75.5±14.9），G1期比例增加〔（73.96±3.53）%、（92.44±1.75）%比（62.87±3.99）%〕、S期比例降低〔（20.54±2.24）%、（14.25±3.84）%比（32.54±2.71）%〕，说明细胞增殖能力再次被抑制（均P＜0.05）；同时Dll1、Dll4、Hes1的mRNA表达量明显下调（2-ΔΔCt：0.65±0.01、0.49±0.15比1.44±0.13，0.07±0.01、0.27±0.03比0.80±0.17，0.59±0.11、0.48±0.06比1.20±0.09，均P＜0.05）。结论 SP可能通过调控Notch信号通路表达来适当促进AECⅡ的增殖、减少其氧化损伤，从而对高氧肺损伤发挥一定的保护作用。

关键词：神经肽P物质、Notch信号通路、肺泡上皮细胞、Ⅱ型、肺损伤

所属期刊栏目：28

分类号：R45;R72

资助基金：国家自然科学基金81341021

在线出版日期：2016-07-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：508-512