亚甲蓝治疗对脓毒症大鼠肺脏诱导型 一氧化氮合酶变化的影响

摘要：

目的：观察亚甲蓝对脓毒症大鼠肺组织诱导型一氧化氮合酶（iNOS）mRNA转录及蛋白表达影响的时间窗及作用机制。方法将126只雌性Wistar大鼠按随机数字表法分为假手术（Sham）组、脓毒症组和亚甲蓝组，每组再按术后时间分为0、6、12、18、24、30、36h7个亚组，每个亚组6只。采用盲肠结扎穿孔术（CLP）制备脓毒症动物模型，Sham组仅开腹和分离盲肠系膜但不结扎和穿孔；亚甲蓝组于CLP术后各时间点分别给予15mg/kg亚甲蓝，其余大鼠给予等量生理盐水。于给药后6h处死各组大鼠，收集肺脏组织标本，用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应（RT-qPCR）检测肺组织iNOSmRNA表达，用蛋白质免疫印迹试验（WesternBlot）检测肺组织iNOS蛋白表达，苏木素-伊红（HE）染色后光镜下观察肺组织病理学改变。结果与Sham组比较，脓毒症组术后6、12、18、24h肺组织iNOSmRNA表达明显升高（2-ΔΔCt：6h为2.42±0.66比1.00±0.38，P＝0.002；12h为2.54±0.76比1.00±0.27，P＝0.000；18h为5.46±2.26比1.00±0.38，P＝0.000；24h为3.03±0.62比1.00±0.33，P＝0.001）；12、18、24hiNOS蛋白表达也明显升高（灰度值：12h为2.54±0.45比1.00±0.35，P＝0.000；18h 为2.65±0.64比1.00±0.33，P＝0.000；24h 为3.03±0.59比1.00±0.24，P＝0.000）。与脓毒症组比较，亚甲蓝组6、12、18、24h肺组织iNOSmRNA表达明显降低（2-ΔΔCt：6h为1.55±0.82比2.42±0.66，P＝0.034；12h为1.84±0.42比2.54±0.76，P＝0.016；18h为2.66±1.09比5.46±2.26，P＝0.003；24h为2.20±0.29比3.03±0.62，P＝0.002）；12、18、24hiNOS蛋白表达也明显降低（灰度值：12h为1.84±0.18比2.54±0.45，P＝0.003；18h为1.87±0.27比2.65±0.64，P＝0.008；24h为2.20±0.50比3.03±0.59，P＝0.008）。组织病理学观察显示，各时间点脓毒症组和亚甲蓝组大鼠肺损伤程度（包括红细胞渗出、肺间质水肿、炎性细胞浸润、肺泡塌陷等）均明显重于Sham组，而亚甲蓝组大鼠肺损伤程度较脓毒症组无明显改善。结论脓毒症大鼠肺组织iNOSmRNA表达于CLP术后6～24h上调，蛋白表达则于12～24h上调；亚甲蓝可明显抑制脓毒症大鼠肺组织iNOSmRNA和蛋白表达，但不能减轻脓毒症肺损伤的程度。

关键词：脓毒症、诱导型一氧化氮合酶、亚甲蓝、肺损伤

分类号：R3 ;S86

资助基金：国家自然科学基金81160232@@@@ National Natural Foundation of China 81160232

在线出版日期：2016-04-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：134-139