10.3760/cma.j.issn.2095-4352.2016.01.003
正丁酸抑制脂多糖诱导肺纤维化的作用及机制
目的观察组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制剂正丁酸(BA)抑制脂多糖(LPS)诱导小鼠肺纤维化过程的作用,并探讨其作用机制。方法将30只C57/BL6小鼠按随机数字表法分为LPS刺激组(腹腔注射10mg/kgLPS)、BA预处理+LPS刺激组(BA10mg/kg灌胃后腹腔注射LPS10mg/kg)和阴性对照组(经口灌注和腹腔注射等量生理盐水),每组10只。制模后2周及4周每组各无痛处死5只小鼠取肺组织,用HDAC活性荧光分析试剂盒检测肺组织HDAC活性;采用蛋白质免疫印迹试验(WesternBlot)检测肺组织乙酰化组蛋白H3、H4(Ace-H3、Ace-H4)和胸腺细胞分化抗原-1(Thy-1)蛋白表达;采用实时定量反转录-聚合酶链反应(real-timeRT-PCR)检测肺组织Thy-1mRNA表达;用苏木素-伊红(HE)染色和Masson胶原蛋白染色光镜下观察肺组织炎症和纤维化情况;用羟脯氨酸检测试剂盒测定肺组织羟脯氨酸含量。结果与阴性对照组相比:腹腔注射LPS后肺组织出现明显的炎症反应和纤维化加重;羟脯氨酸含量增加(μg/mg:2周为8.384±0.632比4.388±0.334,4周为8.308±0.244比4.370±0.342,均P<0.01);HDAC活化程度增加(μmol/L:2周为7.243±0.384比3.628±0.641,4周为6.479±0.202比3.238±0.524,均P<0.01);组蛋白H3、H4去乙酰化程度增加〔Ace-H3相对表达量(灰度值):2周为0.516±0.115比1.005±0.359,4周为0.633±0.143比1.092±0.193,均P<0.05;Ace-H4相对表达量(灰度值):2周为0.402±0.164比0.759±0.187,P>0.05;4周为0.426±0.098比0.858±0.177,P<0.01〕;Thy-1基因及蛋白表达量降低〔Thy-1mRNA(2-ΔΔCt):2周为0.606±0.066比1.005±0.109,P<0.01,4周为0.824±0.101比1.210±0.400,P>0.05;Thy-1蛋白相对表达量(灰度值):2周为0.725±0.284比1.249±0.297,4周为0.589±0.139比1.372±0.343,均P<0.05〕。使用BA后能抑制上述过程,在2周和4周羟脯氨酸含量、HDAC活化,2周Thy-1mRNA表达,4周Ace-H4、Thy-1蛋白表达与LPS刺激组相比,表现出统计学意义〔羟脯氨酸含量(μg/mg):2周为5.943±0.726比8.384±0.632,4周为4.938±0.209比8.308±0.244;HDAC活性(μmol/L):2周为4.386±0.117比7.243±0.384,4周为4.863±0.096比6.479±0.202;2周Thy-1mRNA(2-ΔΔCt):0.884±0.216比0.606±0.066;4周Ace-H4相对表达量(灰度值):0.715±0.145比0.426±0.098;4周Thy-1蛋白相对表达量(灰度值):0.939±0.098比0.589±0.139;P<0.05或P<0.01〕。结论 LPS诱导小鼠肺组织纤维化过程与肺组织HDAC活化、组蛋白H3和H4去乙酰化以及Thy-1基因表达降低相关。HDAC抑制剂BA预处理能通过抑制HDAC活化以及组蛋白H4去乙酰化过程,从而抑制由LPS诱导的Thy-1基因表达降低及肺纤维化过程。
肺纤维化、脂多糖、组蛋白去乙酰化酶、正丁酸、表观遗传学调控
R73;O65
国家自然科学基金81270122Fund program:National Natural Science Foundation of China 81270122
2016-03-25(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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