正丁酸抑制脂多糖诱导肺纤维化的作用及机制

摘要：

目的观察组蛋白去乙酰化酶（HDAC）抑制剂正丁酸（BA）抑制脂多糖（LPS）诱导小鼠肺纤维化过程的作用，并探讨其作用机制。方法将30只C57/BL6小鼠按随机数字表法分为LPS刺激组（腹腔注射10mg/kgLPS）、BA预处理+LPS刺激组（BA10mg/kg灌胃后腹腔注射LPS10mg/kg）和阴性对照组（经口灌注和腹腔注射等量生理盐水），每组10只。制模后2周及4周每组各无痛处死5只小鼠取肺组织，用HDAC活性荧光分析试剂盒检测肺组织HDAC活性；采用蛋白质免疫印迹试验（WesternBlot）检测肺组织乙酰化组蛋白H3、H4（Ace-H3、Ace-H4）和胸腺细胞分化抗原-1（Thy-1）蛋白表达；采用实时定量反转录-聚合酶链反应（real-timeRT-PCR）检测肺组织Thy-1mRNA表达；用苏木素-伊红（HE）染色和Masson胶原蛋白染色光镜下观察肺组织炎症和纤维化情况；用羟脯氨酸检测试剂盒测定肺组织羟脯氨酸含量。结果与阴性对照组相比：腹腔注射LPS后肺组织出现明显的炎症反应和纤维化加重；羟脯氨酸含量增加（μg/mg：2周为8.384±0.632比4.388±0.334，4周为8.308±0.244比4.370±0.342，均P＜0.01）；HDAC活化程度增加（μmol/L：2周为7.243±0.384比3.628±0.641，4周为6.479±0.202比3.238±0.524，均P＜0.01）；组蛋白H3、H4去乙酰化程度增加〔Ace-H3相对表达量（灰度值）：2周为0.516±0.115比1.005±0.359，4周为0.633±0.143比1.092±0.193，均P＜0.05；Ace-H4相对表达量（灰度值）：2周为0.402±0.164比0.759±0.187，P＞0.05；4周为0.426±0.098比0.858±0.177，P＜0.01〕；Thy-1基因及蛋白表达量降低〔Thy-1mRNA（2-ΔΔCt）：2周为0.606±0.066比1.005±0.109，P＜0.01，4周为0.824±0.101比1.210±0.400，P＞0.05；Thy-1蛋白相对表达量（灰度值）：2周为0.725±0.284比1.249±0.297，4周为0.589±0.139比1.372±0.343，均P＜0.05〕。使用BA后能抑制上述过程，在2周和4周羟脯氨酸含量、HDAC活化，2周Thy-1mRNA表达，4周Ace-H4、Thy-1蛋白表达与LPS刺激组相比，表现出统计学意义〔羟脯氨酸含量（μg/mg）：2周为5.943±0.726比8.384±0.632，4周为4.938±0.209比8.308±0.244；HDAC活性（μmol/L）：2周为4.386±0.117比7.243±0.384，4周为4.863±0.096比6.479±0.202；2周Thy-1mRNA（2-ΔΔCt）：0.884±0.216比0.606±0.066；4周Ace-H4相对表达量（灰度值）：0.715±0.145比0.426±0.098；4周Thy-1蛋白相对表达量（灰度值）：0.939±0.098比0.589±0.139；P＜0.05或P＜0.01〕。结论 LPS诱导小鼠肺组织纤维化过程与肺组织HDAC活化、组蛋白H3和H4去乙酰化以及Thy-1基因表达降低相关。HDAC抑制剂BA预处理能通过抑制HDAC活化以及组蛋白H4去乙酰化过程，从而抑制由LPS诱导的Thy-1基因表达降低及肺纤维化过程。

关键词：肺纤维化、脂多糖、组蛋白去乙酰化酶、正丁酸、表观遗传学调控

分类号：R73;O65

资助基金：国家自然科学基金81270122Fund program:National Natural Science Foundation of China 81270122

在线出版日期：2016-03-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：8-14