高氧所致氧化应激状态下肺泡上皮细胞Toll样受体的表达及其功能研究

摘要：

目的 观察高氧暴露后肺泡上皮细胞内活性氧(ROS)水平与Toll样受体(TLRs)基因、蛋白表达变化及其与信号通路功能之间的关系,探讨高氧所致肺损伤炎症反应的可能机制.方法 将体外培养的人肺腺癌A549细胞株分为空气对照组、高氧组、N-乙酰半胱氨酸(NAC)预处理组；高氧组细胞在＞90％O2的高氧环境中暴露2、6、12、24及48 h,NAC预处理组细胞予以ROS清除剂NAC预处理后高氧暴露6h.于相应时间点用流式细胞术检测细胞内ROS含量以及TLR2/4蛋白在细胞中的分布和表达；用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测TLR2/4 mRNA表达；用酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞上清液中白细胞介素(IL-6、IL-8)的含量.结果 A549细胞有TLR2/4表达,并且以细胞质内表达为主.与空气对照组比较,高氧组暴露2h细胞内ROS含量(荧光强度)即明显增高(11.820±3.123比7.223±1.170,P＜0.01),随高氧暴露时间延长呈进行性增高,于48 h达高峰(113.837±5.247,P＜0.01)；高氧暴露2 h TLR2/4 mRNA表达至高峰(TLR2 mRNA:1.820±0.056比1.263±0.023;TLR4 mRNA:2.080±0.220比1.317±0.107,均P＜0.01),随高氧暴露时间延长,TLR2/4 mRNA表达虽仍有增多,但无显著变化；高氧暴露后TLR2/4蛋白表达显著增高,6h表达至高峰(TLR2蛋白:8.370±1.548比3.930±0.277;TLR4蛋白:25.803±5.783比8.867±2.230,均P＜0.01),以细胞质内表达为主；随高氧暴露时间延长,细胞上清液中IL-6(ng/L)、IL-8(ng/L)水平呈进行性增高,于48 h达高峰(IL-6:2 213.41±69.99比9.76±1.47;IL-8:11 520.38±429.93比159.56±20.80,均P＜0.01).在NAC预处理情况下,高氧刺激后,细胞内ROS水平明显降低(14.050±1.257比31.180±2.336,P＜0.01),细胞TLR2/4 mRNA和蛋白表达显著降低(TLR2 mRNA:1.270±0.061比1.683±0.025; TLR4 mRNA:1.507±0.058比1.650±0.139;TLR2蛋白:3.458±0.258比8.370±1.548;TLR4蛋白:11.611±3.403比25.803±5.783,均P＜0.05),细胞上清液中IL-6、IL-8水平显著下降(IL-6:8.42±0.70比73.51±16.70;IL-8:134.94±5.19比772.82±96.05,均P＜0.05),与空气对照组比较差异均无统计学意义.结论 A549细胞在高氧暴露后,细胞内ROS能够激活人肺泡上皮细胞TLR2/4的表达,导致前炎症细胞因子IL-6和IL-8的大量释放.

关键词：活性氧、肺泡上皮细胞、Toll样受体2/4、白细胞介素-6/8

所属期刊栏目：23

分类号：R4(临床医学)

资助基金：国家自然科学基金30670931

在线出版日期：2012-01-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：645-649