乳杆菌bsh基因的高效表达及高活性酶蛋白获得

摘要：

目的 探讨乳杆菌bsh基因的高效表达及胆盐水解酶(BSH)的高活性酶蛋白获得.方法 从本实验室保存的12株乳杆菌菌株中,通过Ca2+沉淀法初筛获得具BSH活性的菌株,根据GenBank上公布的16S rRNA同源性最高的乳杆菌的BSH全基因序列,设计特异性引物,PCR扩增获得bsh基因并克隆至表达载体pET-28α,构建BL21-pET-28α-bsh原核表达体系.经IPTG诱导后,对表达产物进行SDS-PAGE分析及Western blot验证.结果 研究表明在分子质量大小约35、37 kD处有预期条带出现,初步表明BSH蛋白表达成功.进而对表达各条件进行优化,最佳酶活条件为IPTG浓度0.1 mmol/L、诱导pH 6.5、诱导温度37℃、诱导时间1h.经镍柱亲和层析纯化制备BSH制剂,邻苯三酚红钼法蛋白浓度测定为1446 mg/dL,茚三酮法测酶活性最高可达21248.27 U/ (g· prot),为纯化前的635.4倍.结论 乳杆菌bsh基因可溶性表达成功且高酶活BSH纯化获取为进一步的研究和药物转化奠定基础.

关键词：筛选、胆盐水解酶、克隆、表达、优化

所属期刊栏目：32

分类号：Q939.9(微生物学)

资助基金：温州市科技局项目;浙江省大学生科技创新活动计划暨新苗人才计划;温州医科大学学生科研立项课题

在线出版日期：2020-12-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：1266-1272