SHV-59型β-内酰胺酶的克隆与表达

摘要：

目的 构建SHV-59型β-内酰胺酶的表达载体.方法 抽提菌株的质粒,应用PCR扩增SHV-59基因全长编码序列,扩增产物经Nde Ⅰ、Xho Ⅰ酶切后连接至pET-26b(+)表达载体,重组质粒经酶切及DNA测序确证后,转入大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达.超声破碎法提取表达蛋白产物,检测其活性,等电聚焦电泳检测蛋白的等电点(PI).结果 PCR扩增获得879 bp的产物,重组表达载体经Nde Ⅰ、Xho Ⅰ酶切及DNA测序后表明,目的基因已成功接入表达载体,重组菌的粗提物经头孢硝噻吩检测显示具有β-内酰胺酶活性,表明载体[pET-26b(+)/SHV-59]构建成功.目的等电点为7.6.结论 β-内酰胺酶SHV-59在原核表达细胞中实验了基因重组表达,为进一步分析酶的特性提供条件.

关键词：β-内酰胺酶、原核表达、等电聚焦电泳

所属期刊栏目：21

分类号：R978.11(药品)

在线出版日期：2010-07-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：825-826,832