基于CRISPR/Cas9技术构建UCA1基因敲除的肺腺癌顺铂耐药株A549/DDP细胞

摘要：

目的 利用CRISPR/Cas9技术构建lncRNA UCA1基因敲除的A549/DDP细胞株.方法 设计并合成sgRNA引物序列,退火形成UCA1-sgRNA双链DNA,与线性化pGK1.1载体连接获得重组质粒;电转染至A549/DDP细胞,对pool细胞(混合克隆)测序检测敲除效率,提取pool的靶细胞进行PCR扩增获得杂交DNA;CruiserTM Enzyme酶切筛选阳性克隆细胞,并对阳性克隆进行测序、TA克隆测序、RT-PCR验证.结果 重组质粒测序结果显示,4个UCA1敲除重组质粒在靶位点插入的片段位置、方向及序列与预期结果一致,证明4个UCA1敲除重组质粒均构建成功.克隆细胞酶切结果显示敲除条带明显小于对照条带;测序及TA克隆测序结果与酶切结果一致;RT-PCR显示UCA1表达水平明显低于对照组(P＜0.001).结论 成功构建UCA1基因敲除的A549/DDP细胞株,为后续的进一步研究提供了实验基础.

关键词：CRISPR/Cas9技术;长链非编码RNA;A549/DDP细胞;UCA1基因

所属期刊栏目：31

分类号：R734.2(肿瘤学)

资助基金：国家自然科学基金;浙江省自然基金;温州市科技局课题

在线出版日期：2021-12-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：2561-2565