Luminex 液相芯片杂交影响因素探讨

摘要：

目的 探讨微珠用量和链霉亲和素-藻红蛋白(SAPE)对Luminex液相芯片杂交结果的影响,并进一步优化杂交条件.方法 以鼠伤寒沙门菌过夜培养物原液和107 cfu/ml、103 cfu/ml菌液为待测物,经多重PCR扩增并标记后,与不同体积微珠混合液和不同浓度SAPE杂交,比较不同杂交条件下的中位荧光强度(median fluorescence intensity,MFI);在此基础上,选择不同用量多重PCR产物、不同杂交温度和时间进行测试,比较其MFI.结果 MFI并不随着微珠用量增加而增强,1 000个每种微珠每反应,即可满足杂交需要;SAPE浓度直接影响样品和背景MFI,当SAPE浓度为5.0 μg/ml时,杂交结果较为理想,其杂交信号MFI稳定,且背景信号较低;过量的PCR产物并不利于杂交反应,且应选择最佳杂交温度和时间,5.0μl是较为理想的PCR产物用量,42℃杂交25 min是较为理想的杂交条件.结论 为优化Luminex液相芯片杂交,选择适当的微珠用量、SAPE浓度、PCR产物用量及杂交温度和时间是非常必要的.

关键词：液相芯片、杂交、影响因素

所属期刊栏目：27

分类号：R440(诊断学)

资助基金：浙江省杭州市科技局医疗卫生及重点专科专病科研攻关专项20140633B24

在线出版日期：2017-07-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：1779-1782