嗜肺军团菌微滴式数字PCR检测方法的建立

摘要：

目的 建立嗜肺军团菌微滴式数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)检测方法,并与实时荧光定量PCR(realtime fluorescence quantitative PCR,qPCR)技术进行比较.方法 针对嗜肺军团菌mip基因设计引物和探针,验证其特异性后,用于ddPCR和qPCR.优化ddPCR的退火温度、引物、探针浓度后,比较ddPCR和qPCR灵敏度和重复性,并对模拟样品进行检测.结果 用5株非嗜肺军团菌测试特异性,结果表明具有良好的特异性.ddPCR与qPCR对DNA模板的检测限一致(42.6 fg),模拟样品检出限为300 cfu/ml,ddPCR的线性相关系数(0.999)略优于qPCR(0.982),ddPCR检测的RSD(0.78％ ～ 14.06％)均高于qPCR(0.30％～1.98％).结论 微滴式数字PCR方法灵敏度高、特异性强,可用于嗜肺军团菌检测,且可以对基因进行绝对定量.

关键词：嗜肺军团菌、微滴式数字PCR、实时荧光定量PCR、检测

所属期刊栏目：27

分类号：R378.99(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：宁波市自然科学基金;宁波市科技创新团队项目;江苏出入境检验检疫局科研项目

在线出版日期：2017-06-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：1233-1236,1239