葡萄糖调节蛋白78的表达、纯化及ATP酶活性实验

摘要：

目的 构建GRP78原核表达重组质粒pW28-GRP78,在大肠杆菌BL21中表达并纯化获得GRP78蛋白质,检测其ATP酶活性.方法 通过NCBI数据库得到GRP78基因序列,PCR扩增获得GRP78基因片段,并插入到带有His标签的载体pW28中,构建重组质粒pW28-GRP78,然后转入大肠杆菌BL21中进行表达,利用镍离子亲和层析纯化目的蛋白.对GRP78进行ATP酶活性检测,并检测GRP78蛋白浓度、反应温度对GRP78蛋白ATP酶活性的影响.结果 GRP78蛋白在大肠杆菌BL21中获得大量上清表达,并成功纯化了目的蛋白;ATP酶活性检测实验发现GRP78蛋白具有ATP酶活性,其酶活性与GRP78蛋白浓度、反应温度有关.结论 GRP78蛋白具有ATP酶活性,并且与蛋白浓度、反应温度有关.

关键词：GRP78基因、表达、纯化、ATP酶活性

所属期刊栏目：26

分类号：Q71(生物大分子的结构和功能)

在线出版日期：2016-09-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：2319-2322