结核分枝杆菌85B基因原核表达及间接ELISA方法的建立

摘要：

目的 原核表达结核分枝杆菌85B融合蛋白,建立该抗原对结核病患者诊断的ELISA方法.方法 制备结核分枝杆菌基因组DNA,从结核分枝杆菌H37Rv基因组中进行PCR扩增85B基因并构建至表达载体pGEX4T-1上.原核表达GST-85B融合蛋白,并通过包涵体对其进行变性和透析复性后,进行GST亲和层析纯化得到可溶性的目的蛋白.用聚丙烯酰胺凝胶电泳和免疫印迹分析重组蛋白,ELISA检测表达融合蛋白的抗原性.结果 扩增出了结核分枝杆菌85B基因,构建了具有正确基因序列的质粒载体pGEX4T-85B,转化大肠杆菌BL21后经诱导产生了高水平的表达产物.超声裂菌法分离的结果显示,目的蛋白在菌体沉淀中以包涵体形式居多.将包涵体变性、复性后用GST亲和层析纯化,蛋白纯化后可被结核病患者血清特异性识别.结论 构建了质粒载体,并诱导表达了GST-85B融合蛋白,为进一步研究结核菌的免疫机制奠定了基础.

关键词：结核分枝杆菌、85B基因、抗原85B、原核表达

所属期刊栏目：25

分类号：S854.43(动物医学（兽医学）)

资助基金：十二五科技重大专项资助2014ZX10003002

在线出版日期：2015-09-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：2449-2452