单管多重荧光定量RT-PCR方法鉴别A组轮状病毒及诺如病毒GⅠ型和GⅡ型

摘要：

目的 建立能同时检测A组轮状病毒、诺如病毒GⅠ型和GⅡ型的多重荧光定量RT-PCR方法.方法 分别选用轮状病毒NSP3基因、诺如病毒GⅠ型和GⅡ型orf1与orf2基因中的64 bp、90 bp和185 bp片段作为荧光定量PCR检测的靶标,设计引物和TaqMan探针,构建标准品,绘制标准曲线,评价检测方法的重复性、特异度和灵敏度,并对138份粪便标本进行检测及测序验证.结果 3种病毒对应的标准曲线分别为:轮状病毒:y=-3.9lgx +41.204;诺如病毒GⅠ型:y=-3.06lgx +40.716;诺如病毒GⅡ型:y=-3.29lgx+ 41.538,质粒标准曲线的方差系数为0.997,灵敏度达到每个反应102 copy/μl,特异度强.138份样本中检出A组轮状病毒、诺如病毒GⅠ型和GⅡ型的检出率分别为32.6％、5.8％和26.1％,与基因测序比对结果相符.结论 构建可用于A组轮状病毒及诺如病毒GⅠ型和GⅡ型的多重荧光定量RT-PCR方法快速、特异且灵敏,可用于临床病原诊断和流行病学调查.

关键词：轮状病毒、诺如病毒、多重荧光逆转录-聚合酶链反应、GⅠ型、GⅡ型

所属期刊栏目：25

分类号：R446.5(诊断学)

在线出版日期：2015-05-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：823-826