甲型H1N1流感病毒实时荧光定量PCR标准阳性模板的构建

摘要：

目的 制备甲型H1N1流感病毒核酸检测标准阳性模板,将其应用于日常甲型流感病毒荧光定量PCR(RT-PCR)检测中.方法 根据甲型H1N1流感病毒基因序列设计出M、HA、NA片段的全基因扩增引物,采用RT-PCR方法扩增以上3个基因片段,将3个目标片段分别连接到PGM-T载体上构建重组质粒,筛选出分别含M、HA、NA基因阳性质粒,将以上阳性质粒两两连接,最后制备成含M、HA、NA基因的标准阳性模板.结果 此模板在-20℃保存3个月对荧光定量PCR结果无显著影响,具有较好的稳定性,Ct值最大变异系数为1.30％.使用该模板建立的定量范围为1×1010 copy/ml～1×1019 copy/ml,标准曲线方程为:y=-2.7232x +40.99.检测方法表明该标准阳性模板具有良好的特异性.结论 本次制备成的标准阳性模板适用于各甲型H1N1流感病毒检测实验室的质量控制,可用于临床诊断.

关键词：甲型H1N1流感病毒、标准模板、荧光定量聚合酶链式反应

所属期刊栏目：25

分类号：R511.7(传染病)

资助基金：国家质检总局科研项目2010IK222;国家质检总局科技计划项目2013IK223

在线出版日期：2015-03-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

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