荧光定量PCR结合EMA/PMA染色法快速检测军团菌活菌

摘要：

目的:利用EMA/PMA经膜核酸染色结合荧光定量PCR技术快速检测军团菌活菌,比较两者的检测效率.方法:军团菌分别经加热灭活和氯消毒剂灭活,加入EMA/PMA处理,确定EMA/PCR、PMA/PCR体系和反应条件,之后进行快速检测.利用BacLight Live/Dead bacterial viability kit验证活菌,同时用培养法做比对.结果:EMA和PMA工作浓度分别为0μg/ml,5μg/ll,10μg/ml,25 μg/ml,50 μg/ml,100 μg/ml,将菌液与之混合后用卤素灯照射,时间分别为0 min,1min,5min,15 min,经测试确定EMA工作浓度为50μg/ml,而PMA为25 μg/ml,光照时间选用15 min.模拟环境样本检测,EMA/PMA real-time PCR检测限均为l04cfu/ml,但培养法PMA处理后平板上菌落多于EMA处理组.结论:EMA/PMA real-time PCR可快速检测军团菌活菌,检测效率相当(均低于不加染料组),PMA效果优于EMA.

关键词：荧光定量PCR、EMA、PMA、军团菌、活菌

所属期刊栏目：23

分类号：R446.5(诊断学)

在线出版日期：2013-09-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：1661-1664