抗CEA F(ab')2抗体在CHO细胞中的表达、纯化及鉴定

摘要：

目的:构建抗人癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)小分子嵌合抗体Rch24 F(ab’)2真核高效表达载体并在中国仓鼠卵巢细胞(Chinese Hamster Ovary Cell,CHO)中实现高产量表达,对Rch24 F(ab’)2的生物学活性进行鉴定.方法:采用DNA重组技术构建Rch24 F(ab’)2真核高效表达载体,转染CHO-dhfr-细胞,通过提高MTX浓度进行基因扩增表达,夹心ELISA法测定抗体产量,筛选高表达细胞株,采用亲和纯化的方法从细胞培养上清中纯化Rch24 F(ab’)2；采用SDS-PAGE鉴定分子量,采用Western blot、直接ELISA和细胞免疫荧光鉴定所表达的Rch24 F(ab’)2的人源性和抗原结合活性.结果:成功构建了抗人CEA小分子嵌合抗体Rch24 F(ab')2的真核高效表达载体,MTX加压扩增表达后筛选获得高产克隆5C4,其抗体产量为32.3 μg/ml;结果显示所分泌的主要为正确组装的Rch24 F(ab’)2分子,分子量约110kD; Western blot、直接ELISA、细胞免疫荧光结果证明所表达的Rch24 F(ab’)2含人抗体的恒定区,并特异地与肿瘤细胞表达的CEA结合.结论:成功地在真核细胞CHO中高效表达了具有良好的生物学活性的抗人CEA小分子嵌合抗体Rch24 F(ab’)2.

关键词：CEA、小分子嵌合抗体、高效表达、CHO

所属期刊栏目：23

分类号：R730.55(肿瘤学)

资助基金："重大新药创制"科技重大专项2011ZX09102-001-28;"重大新药创制"科技重大专项2011ZX09401-030;中国医学科学院肿瘤医院基本科研业务费项目2011JKB24

在线出版日期：2013-08-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：1367-1370