环介导恒温核酸扩增技术快速检测志贺菌研究

摘要：

目的:建立一种快速检测志贺菌的环介导恒温核酸扩增(LAMP)技术,为志贺菌食源性疾病监测、诊断提供技术支撑.方法:在对志贺菌基因序列进行分析、对比基础上,根据志贺菌ipaH基因序列保守区域设计6条特异性引物;通过对LAMP技术反应条件优化,实现对志贺菌的快速检测;用不同来源志贺菌及沙门菌、大肠杆菌、副溶血性弧菌、柠檬酸杆菌、金黄色葡萄球菌、乙型溶血性链球菌等菌株验证方法的敏感性和特异性.结果:当25μl反应体系中含1.6 μmol/L内引物(FIP、BIP)、0.2 μmol/L外引物(F3、B3)、0.2μmol/L环引物(LF、LB)、1 mmol/L dNTP、6 mmol/L MgSO4,0.8 mol/L甜菜碱、1×反应缓冲液、DNA模版,8 U Bst DNA聚合酶,扩增条件为60℃,60 min时,LAMP技术对志贺菌最低检测浓度为200 CFU/ml,经8 h增菌,最低检测浓度可达到20 CFU/ml.对32株不同来源的志贺菌检测结果,所有反应管内肉眼观察有混浊,为阳性,而13种139株其它非志贺菌株反应结果均呈透明为阴性.对50件食品检测结果与常规培养方法及实时荧光PCR方法相比无显著性差异(P＞0.05,x2=0.27).结论:本研究建立的志贺菌LAMP检测方法具有特异性强、灵敏度高、方便快捷、成本低等特点,适合在基层、小型实验室以及无条件购买荧光定量PCR仪的病原微生物检验检测机构推广使用.

关键词：志贺菌、环介导恒温核酸扩增(LAMP)技术、ipaH基因

所属期刊栏目：21

分类号：R378(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：浙江省公共卫生检验检测重点学科群XKQ-009-003

在线出版日期：2011-05-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：389-391