黄热病病毒的实时荧光RT-PCR检测方法研究

摘要：

目的:建立黄热病病毒的实时荧光RT-PCR检测方法.方法:体外转录黄热病病毒3-UTR的部分序列核酸作为阳性对照模板,设计实时荧光RT-PCR不同的反应程序和引物/探针浓度的组合,摸索最佳反应体系条件,并用于黄热病疫苗的检测.结果:建立的黄热病病毒的实时荧光RT-PCR检测方法最佳反应体系为:正向引物YFV-FP终浓度500 nM,反向引物YFV-RP终浓度750 nM,探针YFV-Probe终浓度250 nM;Roche lightcycler仪器适用的扩增程序为:45℃ 10 min,95℃ 10 min;95℃ 5 S,60℃20 s 45次循环.该方法最低检测限约为2copies病毒/反应,与登革病毒、西尼罗病毒、日本脑炎病毒、基孔肯雅病毒等蚊媒病毒无交叉反应.应用该方法对黄热病疫苗进行检测,结果为核酸阳性.结论:该实时荧光RT-PCR方法灵敏度高,特异性强,适用于黄热病病毒的快速检验.

关键词：黄热病病毒、实时荧光RT-PCR、检测

所属期刊栏目：19

分类号：R373.3(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：国家质检总局科技计划项目2007IK203

在线出版日期：2010-02-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：1003-1006