基因芯片检测肿瘤病人多药耐药基因1多态性方法的建立
目的:多药耐药基因1(MDR1)多态性检测是临床预测肿瘤患者化疗疗效的有效方法.利用基因芯片技术,建立快速、准确、高通量检测临床肿瘤病人多药耐药基因1多态性位点的分型方法.方法:分别选取多药耐药基因1中外显子2上的C4T和A61G、外显子11上的G1199A、外显子12上的C1236T、外显子21上的C2650T和G2677T、外显子26上的T3421A和C3435T共8个基因位点,根据GenBank报道的序列,针对每个基因多态性位点设计野生型、突变型探针及对应PCR扩增引物,构建每个多态性位点标准质粒.探针在3'端氨基修饰,按顺序制备基因芯片.下游引物标记荧光素Cy3,血液DNA样本分别通过两对两重不对称PCR扩增后与基因芯片上的探针杂交,通过扫描图像和配套软件对结果进行分析和判断.同时,采用该方法检测40例临床样本.结果:通过标准质粒杂交结果显示,8个位点的探针均能准确地区分野生型和突变型质粒,无非特异性杂交信号;检测40例临床样本,结果显示样本中-4CC,62AA,1199GG,2650CC,3420TF位点未见突变,而发生在1236CC,2677TT,3435CC位点的突变频率较高.1236CC的突变频率为35%,2677GG的突变频率为32.5%,而3435CC的突变频率为30%,此外2677TT和3435TT具有连锁关系,在8例2677TT的患者中有6例也是3435TF基因型.同时,通过测序法进行验证,结果显示基因芯片方法与测序方法的结果完全一致.结论:本研究所建立的基因芯片方法可同时对8个多药耐药基因1多态性位点进行分型,该方法快速、准确,结果可靠,重复性好,为临床上预测肿瘤患者对化疗的疗效提供一种可行的检测手段.
多药耐药基因1、多态性、基因芯片、分型
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R446.6(诊断学)
浙江省医药卫生科学研究基金2004A011
2010-02-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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