产毒型O139群霍乱弧菌实时荧光双重TaqMan聚合酶链反应检测体系的临床应用前研究

摘要：

目的:探讨产毒型O139群霍乱弧菌实时荧光双重TaqMan聚合酶链式反应检测体系对临床模拟标本检测的意义,为该检测体系的临床应用提供可靠的技术依据.方法:将O139群霍乱弧菌灭活菌株悬液”1.0×1010 cfu(菌落形成单位)/ml”连续10倍稀释后与健康成人新鲜粪便混匀,制备成5.0×1010～5.0×108 cfu/g梯度浓度的模拟带菌者粪便标本并提取DNA,用以评价我们自行建立的产毒型O139群霍乱弧菌实时荧光双重TaqMan聚合酶链式反应检测体系对临床模拟标本检测的敏感度、特异性和稳定性.结果:实时荧光双重TaqMan聚合酶链式反应快速检测体系对O139群霍乱弧菌的模拟带菌者粪便标本的检测敏感度为1.0×103 cfu每反应体系(5.0×104 cfu/g),其线性检测范围是1.0×103～1.0×107 cfu每反应体系;在稳定性评价中,对1.0×103～1.0×107 cfu模拟带菌者粪便标本DNA进行3次重复检测的结果显示,ctxA基因扩增反应Ct值的变异系数为1.40%～4.10%,rfb-O139基因扩增反应Ct值的变异系数为0.04%～2.08%;在特异性评价中,3名健康成人新鲜粪便标本的阴性对照均未见特异性扩增曲线.结论:我们建立的产毒型O139群霍乱弧菌实时荧光双重TaqMan聚合酶链式反应检测体系可用于O139群霍乱弧菌临床粪便标本的检测.

关键词：产毒型O139群霍乱弧菌、实时荧光TaqMan聚合酶链式反应、霍乱肠毒素

所属期刊栏目：19

分类号：R516.5(传染病)

资助基金：国家高技术研究863发展规划项目2002AA215013

在线出版日期：2010-02-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：737-739