霍乱弧菌实时荧光PCR方法的建立

摘要：

目的:利用荧光定量PCR技术,建立霍乱弧菌快速敏感特异的检测方法.方法:以霍乱弧菌CT基因作为靶序列,设计一对引物和探针,以霍乱弧菌菌株提取核酸DNA作为模板,优化引物和探针的浓度比和Mg2+浓度,同时验证方法的特异性、敏感性和重复性.结果:本方法建立的反应体系在引物和探针的浓度为0.6 μmol/L、0.6 μmol/L,Mg2+浓度为3.5 mmol/L时,具有良好的特异性和敏感性,与副溶性血性弧菌等7种相关细菌均无交叉反应.在纯菌条件下,检测灵敏度21 cfu/ml.稳定性分析表明,同一样品重复检测3次ct值的变异系数均小于5%.检测水源和海产品结果表明该方法较传统方法敏感、快速、简便.结论:建立的实时荧光PCR方法特异、灵敏、快速,适用于水源、海产品和疫情暴发的霍乱弧菌快速检测.

关键词：霍乱弧菌、TaqMan探针、荧光定量PCR、CT基因

所属期刊栏目：19

分类号：R378.3(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

在线出版日期：2010-02-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：28-29,55