SARS冠状病毒RNA依赖的RNA聚合酶的原核和真核表达

摘要：

目的:在大肠杆菌中表达和纯化重组RDRP蛋白,观察RDRP蛋白在293细胞中的表达及亚细胞定位.方法:构建原核表达质粒pGEX-4T-1-RDRP,实现插入基因的融合表达,经GST亲合层析纯化蛋白.构建真核表达载体pCMV-myc-RDRP瞬时转染293细胞,转染48 h后免疫荧光染色,共聚焦显微镜观察蛋白表达及定位以及Western Blotting检测.结果:成功构建了表达RDRP融合蛋白的原核表达载体,并在大肠杆菌内高效表达,纯化后得到分子量约为121 kDa的融合蛋白.RDRP蛋白在293细胞中高效表达,主要分布在细胞质.结论:获得了重组GST-RDRP融合蛋白,为进一步探讨RDRP的功能奠定基础,在真核细胞中过表达的RDRP蛋白主要定位在细胞质.

关键词：RNA依赖的RNA聚合酶、原核表达、真核表达、蛋白纯化

所属期刊栏目：18

分类号：Q55(酶)

资助基金：国家自然科学基金资助项目30671944

在线出版日期：2008-12-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：1974-1976