双重实时逆转录聚合酶链反应检测甲型和乙型流感病毒

摘要：

目的:建立双重实时荧光RT-PCR方法(DqRT-PCR)以检测甲、乙型流感病毒.方法:设计甲、乙型流感病毒M基因的特异性引物及双标记探针,优化反应条件,建立双重实时荧光RT-PCR方法(DqRT-PCR).设计甲型流感病毒HA1、HA3亚型的H1、H3、N1、N2基因的特异性引物,建立双重普通RT-PCR(DRT-PCR)方法.对HA1、HA3和B型细胞分离株进行DqRT-PCR和DRT-PCR检测.对80份发热病人咽拭子标本进行DqRT-PCR和DRT-PCR检测及细胞培养分离病毒.结果:DqRT-PCR检测甲型和乙型靶DNA片段(重组质粒)最低极限为1×103拷贝.DqRT-PCR和DRT-PCR对11株H1N1、16株H3N2和12株乙型细胞分离株检测,符合率100%.DqRT-PCR、DRT-PCR和细胞培养分离病毒对80份咽拭子标本的阳性率分别为:37.5%(30/80)、30.0%(24/80)和43.8%(35/80),检出率差异未见统计学意义(x2=5.5,P＞0.05).与细胞培养分离病毒法比较,DqRT-PCR的阳性和阴性总符合率为73.7%(59/80),阳性预测值为62.9%(22/35),阴性预测值为88.9%(40/45);经配对x2检验,差异无统计学意义(x2=0.76,P＞0.05).结论:建立DqRT-PCR可应用于甲型和乙型流感的检测,以多种检测方法互补将有助于提高临床标本的病毒检出率.

关键词：流行性感冒病毒、实时逆转录PCR、逆转录PCR

所属期刊栏目：18

分类号：R373.1+3(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

在线出版日期：2008-07-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：219-222