3种食源性致病菌的多重PCR快速检测方法的建立

摘要：

目的:建立快速检测食源性致病菌的多重PCR方法.方法:本研究根据肠毒性大肠埃希菌(enterotoxigenic E.coli,ETEC)的大肠杆菌不耐热毒素(Heat labileenterotoxin,LT)的B亚单位(LTB)、伤寒沙门菌(Salmonella typhi)的侵袭蛋白A(invasion protein A,invA)、福氏志贸菌(Shigella flexneri)侵袭性质粒抗原H基因(invasion plasmid antigen H,ipaH),分别设计了三对引物,预计PCR扩增的目的基因片段为194、279和435 bp.对单个基因PCR和单管多重PCR扩增的特异性、敏感性分析以及建立L16(43)正交试验对单管多重PCR扩增条件如引物浓度、dNTP浓度和Tm值等的优化,建立了快速检测肠毒性大肠埃希菌、伤寒沙门菌和福氏志贺菌的稳定的单管多重PCR方法.结果:该方法检测的灵敏度分别为:145 pg/ml肠毒性大肠埃希菌的基因组DNA、100 ng/ml伤寒沙门菌的基因组DNA、7 ng/ml福氏志贺菌的基因组DNA,与单基因PCR检测的灵敏度相同.并且模拟检测食品中的细菌,结果很稳定.结论:该方法操作简单、检验周期短、特异性和灵敏度高,能够快速地实现对食品中的多种致病菌的诊检和监控.

关键词：多重PCR、食品检验、肠毒性大肠埃希菌、伤寒沙门菌、福氏志贺菌

所属期刊栏目：17

分类号：R155.5(营养卫生、食品卫生)

资助基金：安徽医科大学校科研和教改项目522562

在线出版日期：2008-03-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：1959-1962