空肠弯曲菌peb1A基因的克隆表达及免疫性鉴定

摘要：

目的:克隆空肠弯曲菌peb1A基因,构建其原核表达载体;鉴定重组表达产物的免疫原性.方法:PCR扩增空肠弯曲菌peb1A基因,构建pET-28a(+)-peb1A表达载体.转化E.coli BL21(DF3)后诱导表达,用SDS-PAGE鉴定表达产物.采用Ni-NTA亲和层析法收集表达的目的重组蛋白PEB1.采用CJ全菌抗体的Western blot鉴定rPEB1免疫反应性,双向免疫扩散试验鉴定rPEB1免疫家兔的抗血清效价.结果:所克隆的基因与报道的核苷酸序列同源性为99.9%,转化E.coli BL21(DE3)后,表达产物最高表达量占全菌总蛋白的33%左右,纯化后获得纯度为96%的重组蛋白.Western blot证实rPEB1能与CJ全菌抗体发生特异性免疫结合反应.兔抗rPEB1血清的双向免疫扩散效价为1∶16.结论:成功地构建了高效表达载体pET-28a(+)-peb1A,并获得rPEB1,所表达的rPEB1具有良好的免疫原性和免疫反应性,为基因工程疫苗的研制奠定了基础.

关键词：空肠弯曲菌、peb1A基因、载体构建、原核表达、免疫原性

所属期刊栏目：17

分类号：R392.1

资助基金：贵州省优秀科技教育人才省长基金20001164

在线出版日期：2007-12-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：1577-1579