Taq Man-MGB探针Real-timePCR快速检测单增李斯特菌的研究

摘要：

目的:建立Taq Man-MGB探针Real-time荧光PCR快速检测单增李斯特菌技术.方法:在对单增李斯特菌invA序列进行分析、比较基础上,设计一对特异性Taq Man-MGB探针法引物及探针,通过Real-timePCR反应条件和反应体系的优化,实现对单增李斯特菌的快速检测;用克隆到pMD18-T载体上的李斯特菌invA基因阳参片段及不同菌株、食品标本验证方法的特异性和敏感性.结果:方法的灵敏性高,其循环阈值与模板浓度的对数值具有很好的对应关系,最低可检测57个拷贝数,经18 h增菌,可检测低至4.5 cfu/ml的细菌;特异性强,检测6株单增李斯特菌标准株和100株单增李斯特菌样品分离株的PCR循环域值(CT值)均小于25,而90株威氏李斯特菌、英诺克李斯特菌、绵羊李斯特菌以及非李斯特菌PCR循环域值(CT值)大于35;快速,最快1 h可出结果,实际样品20 h可出结果,而常规细菌培养法需要一周以上;对103份速冻米面食品进行检测,13份阳性,与常规方法无显著性差异(P＞0.05).结论:Taq Man-MGB探针的单增李斯特菌Real-time荧光PCR检测方法具有特异性强,敏感性高,易操作等优点,可推广应用.

关键词：单增李斯特菌、检测、Real-time荧光PCR、Taq Man-MGB探针

所属期刊栏目：17

分类号：R378.99+4(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

在线出版日期：2007-04-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：211-213