含有纯化标签的重组人表皮生长因子的构建及表达

摘要：

目的:高效表达和制备有活性的人表皮生长因子(human epidermal growth factor,hEGF).方法:用DNA重组技术构建EGF基因并插入表达载体pQE-40,与载体上的6×His标签融合,获得的表达质粒pQE-EGF转化E.coli M15[pREP4],得工程菌M15[pQE-EGF].MTT法测定活性,培养工程菌M15[pQE-EGF]并诱导目的蛋白表达,镍离子螯合亲和层析纯化重组EGF.结果:所构建的EGF序列正确,重组EGF在大肠杆菌中以包涵体形式存在,表达量占菌体总蛋白的21.2%,经镍离子亲和层析一步纯化后的重组EGF纯度达90%,得率为94%.复性后的重组EGF具有促Hela细胞生长活性.结论:以E.coli M15[pREP4]/pQE-40系统表达EGF具有技术路线简单、目的蛋白得率高、成本低等优点,是一种制备活性hEGF的有效手段.

关键词：人表皮生长因子、纯化标签、镍离子螯和亲和层析、Hela细胞

所属期刊栏目：16

分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金30400071;广东省自然科学基金2004E039213

在线出版日期：2006-12-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：1153-1155,1174